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consist10

金虫 (正式写手)

[求助] 怎么分离分子伴侣和目的蛋白

如题,HPV16 L1 蛋白带有GST标签,此融合蛋白分子量为82kd, 但和分子量为60kd的GroEL 分子伴侣结合在一起,请问亲们该如何分离呢?按照文献里说的使用ATP和氯化镁,尿素的方法,融合蛋白和分子伴侣总是同时成为沉淀,愁死了,请教大家啊!
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ynkuaile

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
consist10: 金币+3, ★★★很有帮助, O(∩_∩)O谢谢 我也看到过这个方法 以前也试过 貌似结果不好 不过在您的提醒下再次想起 再尝试一次吧 希望结果好 2012-04-25 09:06:18
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-04-25 13:42:06
听说,仅是听说,用可以通过上样前在50mM  Tris-HCl,2mM ATP,10mM
MgSO4,pH7.4中37°C温浴10分钟而破坏。或者把有标签蛋白通过ATP-agarose或相似的纯化介质或进行离子交换层析来除去。要不试试?
5楼2012-04-24 22:34:19
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