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consist10

金虫 (正式写手)

[求助] 怎么分离分子伴侣和目的蛋白

如题,HPV16 L1 蛋白带有GST标签,此融合蛋白分子量为82kd, 但和分子量为60kd的GroEL 分子伴侣结合在一起,请问亲们该如何分离呢?按照文献里说的使用ATP和氯化镁,尿素的方法,融合蛋白和分子伴侣总是同时成为沉淀,愁死了,请教大家啊!
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ynkuaile

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
consist10: 金币+3, ★★★很有帮助, O(∩_∩)O谢谢 我也看到过这个方法 以前也试过 貌似结果不好 不过在您的提醒下再次想起 再尝试一次吧 希望结果好 2012-04-25 09:06:18
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-04-25 13:42:06
听说,仅是听说,用可以通过上样前在50mM  Tris-HCl,2mM ATP,10mM
MgSO4,pH7.4中37°C温浴10分钟而破坏。或者把有标签蛋白通过ATP-agarose或相似的纯化介质或进行离子交换层析来除去。要不试试?
5楼2012-04-24 22:34:19
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to-be

金虫 (正式写手)

同问!这是个很愁人的问题啊,每次纯化杂带都在哪里!
生活是面镜子~
2楼2012-04-24 18:52:13
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consist10

金虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by to-be at 2012-04-24 18:52:13:
同问!这是个很愁人的问题啊,每次纯化杂带都在哪里!

呵呵 你在做什么纯化
3楼2012-04-24 20:31:47
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to-be

金虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by consist10 at 2012-04-24 20:31:47:
呵呵 你在做什么纯化

原核表达真菌中的蛋白,有文献报道,要加入结合分子伴侣的蛋白,把它们拉下来,效果会不错。可是工作繁琐又昂贵啊。有些很大的分子伴侣理论上可行,但实际上分子筛实际都除不掉。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

生活是面镜子~
4楼2012-04-24 21:38:23
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