应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白分离，Sephadex分子量的选择
71/1返回列表
查看: 2196  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

萝莉胖

铜虫 (小有名气)

[求助] 蛋白分离，Sephadex分子量的选择

各位大侠好，小弟用大肠杆菌表达一蛋白，his tag纯化。最后过完Ni柱，SDS-PAGE检测，有两条带，一条是目的蛋白40KD，一条是100KD的his本底蛋白。一般这种情况如何分离这两种蛋白，用Sephadex可以吗，分子量如何选择？

谢谢各位！
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

蛋白相关

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
我是自己的神
1楼 2012-03-23 16:49:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
先试一下离子交换层析柱吧，只要等电点相差1个单位，就可以分离得很好了，凝胶过滤柱也可以试一下，两个蛋白质的分子量都处于G200的分离范围内。
赞一下 回复此楼
流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
2楼2012-03-24 00:12:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

萝莉胖

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2012-03-24 00:12:50:
先试一下离子交换层析柱吧，只要等电点相差1个单位，就可以分离得很好了，凝胶过滤柱也可以试一下，两个蛋白质的分子量都处于G200的分离范围内。

谢谢回答
回复此楼
我是自己的神
3楼2012-03-24 13:46:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lihuan0525

金虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你的量有多大吧，量小的话，可以先试试凝胶过滤，如果量大的话，还是先用离子交换吧，如果你是用来摸索条件，以后有放大的可能，也从离子交换入手吧，毕竟凝胶过滤处理的量还是很少的。
赞一下 回复此楼
4楼2012-03-24 16:49:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

萝莉胖

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by lihuan0525 at 2012-03-24 16:49:13:
你的量有多大吧，量小的话，可以先试试凝胶过滤，如果量大的话，还是先用离子交换吧，如果你是用来摸索条件，以后有放大的可能，也从离子交换入手吧，毕竟凝胶过滤处理的量还是很少的。

量的话就几毫克，不过我看大家都说凝胶（分子筛）效果不好，推荐离子交换，555，离子交换层析木有做过，要从头看起了
赞一下 回复此楼
我是自己的神
5楼2012-03-28 17:38:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lihuan0525

金虫 (职业作家)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 萝莉胖 at 2012-03-28 17:38:39:
量的话就几毫克，不过我看大家都说凝胶（分子筛）效果不好，推荐离子交换，555，离子交换层析木有做过，要从头看起了

如果用离子交换的话，首先你要确定你的目的蛋白的等电点，选择合适的缓冲液，可能还要走梯度，总之离子交换摸索条件可能要时间长点吧。
赞一下 回复此楼
6楼2012-03-28 17:55:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mssj300130

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你随便用个离子交换的填料，然后0-1MNaCl梯度走5-10个体积，如果能出两个峰就比较有希望了，当然如果你上来试的条件就能流穿一种蛋白，那是最好不过了
赞一下 回复此楼
7楼2012-04-10 17:00:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 萝莉胖 的主题更新
71/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 070303一志愿西北大学学硕310找调剂 +5 d如愿上岸 2026-03-12 8/400 2026-03-16 15:19 by peike
[考研] 326求调剂 +3 诺贝尔化学奖觊� 2026-03-15 3/150 2026-03-16 13:51 by houyaoxu
[考研] 308求调剂 +3 是Lupa啊 2026-03-16 3/150 2026-03-16 10:07 by 求调剂zz
[考研] 321求调剂 +4 大米饭！ 2026-03-15 4/200 2026-03-16 08:41 by Linda Hu
[文学芳草园] 伙伴们，祝我生日快乐吧 +15 myrtle 2026-03-10 24/1200 2026-03-15 21:16 by 苏州_逗号
[考研] 0856专硕279求调剂 +5 加油加油！? 2026-03-15 5/250 2026-03-15 11:58 by 2020015
[考研] 【0703化学调剂】-一志愿华中师范大学-六级475 +5 Becho359 2026-03-11 5/250 2026-03-14 11:35 by 哦哦123
[考研] 085600求调剂 +3 a邵星池 2026-03-09 3/150 2026-03-14 01:32 by JourneyLucky
[考研] 材料工程专硕，一志愿中国矿业大学，总分314，求调剂 +5 无懈可击的巨人 2026-03-10 5/250 2026-03-14 00:37 by JourneyLucky
[考研] 271求调剂 +10 生如夏花… 2026-03-11 10/500 2026-03-14 00:35 by 卖报员小雨
[考研] 求调剂，一志愿江南大学环境工程085701 +3 Djdjj12 2026-03-10 4/200 2026-03-14 00:31 by JourneyLucky
[考研] 341求调剂 +3 番茄头--- 2026-03-10 3/150 2026-03-13 23:07 by JourneyLucky
[考研] 求调剂（材料与化工327） +4 爱吃香菜啦 2026-03-11 4/200 2026-03-13 22:11 by JourneyLucky
[考研] 工科，求调剂 +3 我887 2026-03-11 3/150 2026-03-13 21:39 by JourneyLucky
[考研] 材料工程调剂 +4 咪咪空空 2026-03-11 4/200 2026-03-13 19:57 by JourneyLucky
[考研] 307求调剂 +5 超级伊昂大王 2026-03-12 5/250 2026-03-13 15:56 by 棒棒球手
[考研] 085600材料与化工 309分请求调剂 +7 dtdxzxx 2026-03-12 8/400 2026-03-13 14:43 by jxchenghu
[考研] 304求调剂（085602一志愿985） +12 化工人999 2026-03-09 12/600 2026-03-13 12:02 by JourneyLucky
[考研] 材料专硕274一志愿陕西师范大学求调剂 +4 薛云鹏 2026-03-13 4/200 2026-03-13 10:40 by 学员8dgXkO
[考研] 收调剂 +7 调剂的考研学生 2026-03-10 7/350 2026-03-10 17:57 by 麦茶汤圆
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭