24小时热门版块排行榜    

查看: 2459  |  回复: 6
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

萝莉胖

铜虫 (小有名气)

[求助] 蛋白分离,Sephadex分子量的选择

各位大侠好,小弟用大肠杆菌表达一蛋白,his tag纯化。最后过完Ni柱,SDS-PAGE检测,有两条带,一条是目的蛋白40KD,一条是100KD的his本底蛋白。一般这种情况如何分离这两种蛋白,用Sephadex可以吗,分子量如何选择?

谢谢各位!
回复此楼
我是自己的神
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lihuan0525

金虫 (职业作家)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 萝莉胖 at 2012-03-28 17:38:39:
量的话就几毫克,不过我看大家都说凝胶(分子筛)效果不好,推荐离子交换,555,离子交换层析木有做过,要从头看起了

如果用离子交换的话,首先你要确定你的目的蛋白的等电点,选择合适的缓冲液,可能还要走梯度,总之离子交换摸索条件可能要时间长点吧。
6楼2012-03-28 17:55:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答

冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

先试一下离子交换层析柱吧,只要等电点相差1个单位,就可以分离得很好了,凝胶过滤柱也可以试一下,两个蛋白质的分子量都处于G200的分离范围内。
流星来时我许了个愿,愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具,久不看论坛一来就提问者,宁弃EPI和VIP也不回帖。
2楼2012-03-24 00:12:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

萝莉胖

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2012-03-24 00:12:50:
先试一下离子交换层析柱吧,只要等电点相差1个单位,就可以分离得很好了,凝胶过滤柱也可以试一下,两个蛋白质的分子量都处于G200的分离范围内。

谢谢回答
我是自己的神
3楼2012-03-24 13:46:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lihuan0525

金虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你的量有多大吧,量小的话,可以先试试凝胶过滤,如果量大的话,还是先用离子交换吧,如果你是用来摸索条件,以后有放大的可能,也从离子交换入手吧,毕竟凝胶过滤处理的量还是很少的。
4楼2012-03-24 16:49:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 快农历七夕节了,轻松一下,男人悄悄话,女施主请不要进来。 +3 Tide man 2026-08-14 3/150 2026-08-16 17:47 by jurkat.1640
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +32 医学老男孩 2026-08-13 72/3600 2026-08-16 13:15 by 医学老男孩
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 26/1300 2026-08-16 12:35 by 启萌科技
[基金申请] 我的国基提前知道中了,可是同事的操作让我实在接受不了,怎么会有这样的人 +11 家与远方 2026-08-10 16/800 2026-08-16 10:28 by ray43
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的,真有人买论文么?感觉没必要啊 +12 Tide man 2026-08-10 13/650 2026-08-15 16:34 by 氺木
[基金申请] 各位道友,我要去昆明玩几天,回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果? +4 yuleib84 2026-08-11 4/200 2026-08-14 23:05 by lfy8008
[基金申请] 奇怪,两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +8 布布和一二 2026-08-10 11/550 2026-08-14 14:58 by Equinoxhua
[硕博家园] 请教兼职经验 +3 是阿文鸭 2026-08-09 3/150 2026-08-14 12:07 by HER12025
[基金申请] FileCode能看出啥? +10 要乐观耀哥 2026-08-10 32/1600 2026-08-14 09:37 by 要乐观耀哥
[基金申请] 静等基金结果 +8 gjjjzhong 2026-08-10 21/1050 2026-08-13 17:56 by 且听虎啸
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 结合人工智能,周易传统文化,filecode打分制来了,3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见,大家看看几个A,几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分? +11 yufeiwaner 2026-08-09 13/650 2026-08-12 08:17 by yufeiwaner
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[基金申请] 什么时候出结果,有咨询渠道??? +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
信息提示
请填处理意见