应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白分离，Sephadex分子量的选择
71/1返回列表
查看: 2526  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

萝莉胖

铜虫 (小有名气)

[求助] 蛋白分离，Sephadex分子量的选择

各位大侠好，小弟用大肠杆菌表达一蛋白，his tag纯化。最后过完Ni柱，SDS-PAGE检测，有两条带，一条是目的蛋白40KD，一条是100KD的his本底蛋白。一般这种情况如何分离这两种蛋白，用Sephadex可以吗，分子量如何选择？

谢谢各位！
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

蛋白相关

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
我是自己的神
1楼 2012-03-23 16:49:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
先试一下离子交换层析柱吧，只要等电点相差1个单位，就可以分离得很好了，凝胶过滤柱也可以试一下，两个蛋白质的分子量都处于G200的分离范围内。
赞一下 回复此楼
流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
2楼2012-03-24 00:12:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

萝莉胖

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2012-03-24 00:12:50:
先试一下离子交换层析柱吧，只要等电点相差1个单位，就可以分离得很好了，凝胶过滤柱也可以试一下，两个蛋白质的分子量都处于G200的分离范围内。

谢谢回答
回复此楼
我是自己的神
3楼2012-03-24 13:46:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lihuan0525

金虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你的量有多大吧，量小的话，可以先试试凝胶过滤，如果量大的话，还是先用离子交换吧，如果你是用来摸索条件，以后有放大的可能，也从离子交换入手吧，毕竟凝胶过滤处理的量还是很少的。
赞一下 回复此楼
4楼2012-03-24 16:49:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

萝莉胖

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by lihuan0525 at 2012-03-24 16:49:13:
你的量有多大吧，量小的话，可以先试试凝胶过滤，如果量大的话，还是先用离子交换吧，如果你是用来摸索条件，以后有放大的可能，也从离子交换入手吧，毕竟凝胶过滤处理的量还是很少的。

量的话就几毫克，不过我看大家都说凝胶（分子筛）效果不好，推荐离子交换，555，离子交换层析木有做过，要从头看起了
赞一下 回复此楼
我是自己的神
5楼2012-03-28 17:38:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lihuan0525

金虫 (职业作家)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 萝莉胖 at 2012-03-28 17:38:39:
量的话就几毫克，不过我看大家都说凝胶（分子筛）效果不好，推荐离子交换，555，离子交换层析木有做过，要从头看起了

如果用离子交换的话，首先你要确定你的目的蛋白的等电点，选择合适的缓冲液，可能还要走梯度，总之离子交换摸索条件可能要时间长点吧。
赞一下 回复此楼
6楼2012-03-28 17:55:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mssj300130

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你随便用个离子交换的填料，然后0-1MNaCl梯度走5-10个体积，如果能出两个峰就比较有希望了，当然如果你上来试的条件就能流穿一种蛋白，那是最好不过了
赞一下 回复此楼
7楼2012-04-10 17:00:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 萝莉胖 的主题更新
71/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[博后之家] 广西大学-广州大学招聘博士后 欢迎广大优秀人才！！！ +5 SCSIOyxguo 2026-09-03 8/400 2026-09-06 15:06 by 可爱小花朵
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 j5mmowWXNWxv 2026-09-05 3/150 2026-09-06 13:09 by eObJPa4gWmp6
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 j5mmowWXNWxv 2026-09-05 3/150 2026-09-06 13:09 by eObJPa4gWmp6
[考博] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 j5mmowWXNWxv 2026-09-05 4/200 2026-09-06 12:49 by eObJPa4gWmp6
[基金申请] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 j5mmowWXNWxv 2026-09-05 3/150 2026-09-06 12:49 by eObJPa4gWmp6
[考博] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 j5mmowWXNWxv 2026-09-05 4/200 2026-09-06 12:29 by eObJPa4gWmp6
[找工作] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-05 7/350 2026-09-06 11:40 by eObJPa4gWmp6
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-05 7/350 2026-09-06 11:20 by eObJPa4gWmp6
[考研] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-04 7/350 2026-09-06 11:00 by eObJPa4gWmp6
[论文投稿] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-04 8/400 2026-09-06 11:00 by eObJPa4gWmp6
[考研] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-05 4/200 2026-09-06 07:20 by E1iiBLMU2XnD
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +6 7ZYIEW2YWn72 2026-09-04 9/450 2026-09-06 06:00 by E1iiBLMU2XnD
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +8 CRJ0Aq2FtVH0 2026-09-03 15/750 2026-09-06 05:48 by E1iiBLMU2XnD
[论文投稿] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-05 5/250 2026-09-06 02:19 by E1iiBLMU2XnD
[文学芳草园] 两块石头 +6 阿美_Lml888 2026-09-03 8/400 2026-09-05 13:52 by 阿美_Lml888
[文学芳草园] 初秋的晨风 +4 阿美_Lml888 2026-09-04 6/300 2026-09-05 13:51 by 阿美_Lml888
[基金申请] 学科评审组评审是指会评吗？ +6 瞬息宇宙 2026-08-31 9/450 2026-09-05 13:11 by haizai99
[硕博家园] Ei源刊怎么投 +4 Fengshun9711 2026-09-04 4/200 2026-09-04 19:30 by 研途知予
[硕博家园] 哈尔滨工业大学韩晓军教授课题组招收2027年硕士推免生及博士研究生 +3 灯灯灯灯DDDD 2026-09-03 3/150 2026-09-03 21:22 by 科研皮皮猪
[基金申请] 要骂人了，新模版改版就是要淡化问题凝练这种虚的东西，结果有个评委还在说凝练得不够 +9 瞬息宇宙 2026-08-31 17/850 2026-09-02 14:04 by anjeeshine
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭