应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白分离，Sephadex分子量的选择
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
71/1返回列表
查看: 2235  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

萝莉胖

铜虫 (小有名气)

[求助] 蛋白分离，Sephadex分子量的选择

各位大侠好，小弟用大肠杆菌表达一蛋白，his tag纯化。最后过完Ni柱，SDS-PAGE检测，有两条带，一条是目的蛋白40KD，一条是100KD的his本底蛋白。一般这种情况如何分离这两种蛋白，用Sephadex可以吗，分子量如何选择？

谢谢各位！
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

蛋白相关

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
我是自己的神
1楼 2012-03-23 16:49:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
先试一下离子交换层析柱吧，只要等电点相差1个单位，就可以分离得很好了，凝胶过滤柱也可以试一下，两个蛋白质的分子量都处于G200的分离范围内。
赞一下 回复此楼
流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
2楼2012-03-24 00:12:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

萝莉胖

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2012-03-24 00:12:50:
先试一下离子交换层析柱吧，只要等电点相差1个单位，就可以分离得很好了，凝胶过滤柱也可以试一下，两个蛋白质的分子量都处于G200的分离范围内。

谢谢回答
回复此楼
我是自己的神
3楼2012-03-24 13:46:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lihuan0525

金虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你的量有多大吧，量小的话，可以先试试凝胶过滤，如果量大的话，还是先用离子交换吧，如果你是用来摸索条件，以后有放大的可能，也从离子交换入手吧，毕竟凝胶过滤处理的量还是很少的。
赞一下 回复此楼
4楼2012-03-24 16:49:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

萝莉胖

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by lihuan0525 at 2012-03-24 16:49:13:
你的量有多大吧，量小的话，可以先试试凝胶过滤，如果量大的话，还是先用离子交换吧，如果你是用来摸索条件，以后有放大的可能，也从离子交换入手吧，毕竟凝胶过滤处理的量还是很少的。

量的话就几毫克，不过我看大家都说凝胶（分子筛）效果不好，推荐离子交换，555，离子交换层析木有做过，要从头看起了
赞一下 回复此楼
我是自己的神
5楼2012-03-28 17:38:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lihuan0525

金虫 (职业作家)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 萝莉胖 at 2012-03-28 17:38:39:
量的话就几毫克，不过我看大家都说凝胶（分子筛）效果不好，推荐离子交换，555，离子交换层析木有做过，要从头看起了

如果用离子交换的话，首先你要确定你的目的蛋白的等电点，选择合适的缓冲液，可能还要走梯度，总之离子交换摸索条件可能要时间长点吧。
赞一下 回复此楼
6楼2012-03-28 17:55:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mssj300130

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你随便用个离子交换的填料，然后0-1MNaCl梯度走5-10个体积，如果能出两个峰就比较有希望了，当然如果你上来试的条件就能流穿一种蛋白，那是最好不过了
赞一下 回复此楼
7楼2012-04-10 17:00:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 萝莉胖 的主题更新
71/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 专硕0854初试考材科基，求调剂 +4 3220548044 2026-04-06 5/250 2026-04-06 08:33 by zhangdingwa
[考研] 0703求调剂383分 +9 W55j 2026-04-03 9/450 2026-04-06 06:50 by houyaoxu
[考研] 一志愿9材料学硕297已过六级求调剂推荐 +11 adaie 2026-04-04 12/600 2026-04-05 19:04 by 蓝云思雨
[考研] 0817化学工程与技术求调剂，一志愿中海洋319 +13 lv945 2026-04-04 13/650 2026-04-05 18:14 by 猪会飞
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +4 崔wj 2026-04-04 5/250 2026-04-05 14:06 by imissbao
[考研] 0854求调剂 +4 assdll 2026-04-04 4/200 2026-04-05 09:44 by zhq0425
[考研] 278求调剂 +3 依旧！ 2026-04-02 4/200 2026-04-04 20:27 by 蓝云思雨
[考研] 321求调剂 +6 认真求上学 2026-04-03 6/300 2026-04-04 19:51 by dongzh2009
[考研] 309分085801求调剂 +11 MY_angel 2026-03-31 11/550 2026-04-04 19:11 by 蓝云思雨
[考研] 292求调剂 +11 2022080213 2026-04-04 13/650 2026-04-04 18:38 by macy2011
[考研] 本9一志愿2 0854低分专硕286求调剂 +9 芒种111 2026-04-04 9/450 2026-04-04 11:01 by tangruihua
[考研] 一志愿双非085502，267分，过四级求调剂 +3 再忙也要吃饭啊 2026-04-03 3/150 2026-04-04 05:03 by gswylq
[考研] 265求调剂 +20 梁梁校校 2026-04-01 21/1050 2026-04-04 00:38 by userper
[考研] 机械专硕297 +3 Afksy 2026-04-03 3/150 2026-04-03 14:24 by 1753564080
[考研] 313求调剂 +3 ～微微凉～ 2026-04-03 3/150 2026-04-03 11:25 by 啵啵啵0119
[考研] 274求调剂 +10 薛定谔的虎。 2026-04-01 10/500 2026-04-03 10:13 by tianyyysss
[考研] 362求调剂 +14 西南交材料专硕3 2026-03-31 14/700 2026-04-02 17:50 by yunlongyang
[考博] 26年申博 +3 staryer 2026-03-30 4/200 2026-04-01 23:21 by ai4pharm
[考研] 285求调剂 +11 AZMK 2026-04-01 11/550 2026-04-01 22:40 by peike
[考研] 085602化学工程268分蹲调剂 +8 月照花林。 2026-04-01 8/400 2026-04-01 22:08 by 无际的草原
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭