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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 【求助】真核基因在原核生物表达
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小蚂蚁吃木头

铜虫 (初入文坛)

[交流] 【求助】真核基因在原核生物表达

基因工程老师要求做一套从基因选择、到质粒选取、到细胞选取转入、筛选手段、到表达蛋白纯化的PPT，现在暂时没有什么想法，哪位做过的给个方向，谢谢。如果有详细的过程那就更好的了。我是本科菜鸟，大家多多指教。
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1楼 2011-04-16 21:45:43
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)
楼主可以参考一下NOVAGEN的手册，包括全套过程。
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2楼2011-04-16 22:38:41
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
你可以做这个PPT：
土壤样品宏基因组DNA的提取
DNA与克隆质粒pWEB:TNC连接
转化/转染大肠杆菌DH5alpha克隆宿主构建文库
平板检测纤维素酶活性
纤维素酶基因的亚克隆
纤维素酶基因与表达载体pET30连接转化克隆宿主大肠杆菌JM109
pET30转化表达宿主大肠杆菌BL21（DE3）
蛋白质诱导表达
重组蛋白质的提取（超声波破碎细胞）
重组蛋白质的尿素复溶和镍柱纯化（SDS-PAGE电泳检测蛋白质纯度）
重组蛋白质的离子交换层析柱纯化（SDS-PAGE电泳检测蛋白质纯度）
重组蛋白质酶学特性测定及分析

这样，你就能得满分了。
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4楼2011-07-21 20:02:55
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
上面提到的基因很可能是原核生物的，但是为什么你老师要你选择真核基因在原核生物中表达？真核生物和原核生物是不同的，在原核生物中糖基化少，很可能得不到理想的真核生物基因表达的蛋白质，这样一来可能跟在这个基因本来的生物中表达的结果有性质差异，你问问你老师看能不能改成原核生物基因在原核生物中表达，感觉更靠谱些。

要是实在是改不了，那你再跟帖说明。
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5楼2011-07-21 20:11:51
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fangxianjun3楼
2011-07-21 17:14   回复  
肉
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