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wcx蜗牛

无虫 (小有名气)

[求助] 真核表达质粒构建

本人近期用pcDNA3.1 myc/his A构建真核表达质粒,师兄建议在上游ATG前加上kozak序列,我查了kozak序列常用为GCCACC,但我设计引物是若全加入退货温度过高,我想只加入ACC三个碱基,不知可以,能否提高蛋白翻译效率。
   其次我查目的基因上有一段信号肽,老师建议用pcDNA3.1 myc/his A构建真核表达质粒去掉信号肽,我不明白信号肽不是指导蛋白质的跨膜转移,为什么不用加信号肽。
   请求高人指点。谢谢!
   注明:我克隆的是人缘基因
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wcx蜗牛

无虫 (小有名气)

自己顶下哦
2楼2012-04-16 08:38:02
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黄油411

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wcx蜗牛: 金币+3 2012-04-18 10:07:53
最好还是加kozak序列,退火温度高不高只要能P出来就没有关系。PCDNA3上自带有真核表达的信号肽,一般都不需要加,不知道你加两个会不会有影响
专心做抗体
3楼2012-04-16 09:31:53
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wcx蜗牛

无虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 黄油411 at 2012-04-16 09:31:53:
最好还是加kozak序列,退火温度高不高只要能P出来就没有关系。PCDNA3上自带有真核表达的信号肽,一般都不需要加,不知道你加两个会不会有影响

PCDNA3上好像带的没有信号肽吧
4楼2012-04-18 10:08:25
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yiyijiayou21

新虫 (初入文坛)

想问一下楼主仁兄,你那是否有pcDNA3.1/ myc -His(-) A 这个载体的序列和酶切位点?!!!我也在做这方面的克隆表达,但是没有找到他的酶切位点,现在一直碰壁,还希望能帮帮忙!万分感谢!!!
学会克服贪念,提升自己!
5楼2013-03-03 13:21:47
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