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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 真核表达质粒构建
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wcx蜗牛

无虫 (小有名气)

[求助] 真核表达质粒构建

本人近期用pcDNA3.1 myc/his A构建真核表达质粒，师兄建议在上游ATG前加上kozak序列，我查了kozak序列常用为GCCACC，但我设计引物是若全加入退货温度过高，我想只加入ACC三个碱基，不知可以，能否提高蛋白翻译效率。
   其次我查目的基因上有一段信号肽，老师建议用pcDNA3.1 myc/his A构建真核表达质粒去掉信号肽，我不明白信号肽不是指导蛋白质的跨膜转移，为什么不用加信号肽。
   请求高人指点。谢谢！
   注明：我克隆的是人缘基因
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1楼 2012-04-13 20:24:21
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wcx蜗牛

无虫 (小有名气)
自己顶下哦
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2楼2012-04-16 08:38:02
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黄油411

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wcx蜗牛: 金币+3 2012-04-18 10:07:53
最好还是加kozak序列，退火温度高不高只要能P出来就没有关系。PCDNA3上自带有真核表达的信号肽，一般都不需要加，不知道你加两个会不会有影响
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专心做抗体
3楼2012-04-16 09:31:53
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wcx蜗牛

无虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 黄油411 at 2012-04-16 09:31:53:
最好还是加kozak序列，退火温度高不高只要能P出来就没有关系。PCDNA3上自带有真核表达的信号肽，一般都不需要加，不知道你加两个会不会有影响

PCDNA3上好像带的没有信号肽吧
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4楼2012-04-18 10:08:25
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yiyijiayou21

新虫 (初入文坛)
想问一下楼主仁兄，你那是否有pcDNA3.1/ myc -His(-) A 这个载体的序列和酶切位点？！！！我也在做这方面的克隆表达，但是没有找到他的酶切位点，现在一直碰壁，还希望能帮帮忙！万分感谢！！！
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学会克服贪念，提升自己！
5楼2013-03-03 13:21:47
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