24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 4436  |  回复: 7

hdfish860907

铁虫 (初入文坛)

[求助] 两个基因融合构建真核表达载体需要去掉信号肽吗?

用的是真核表达载体PCDNA3.1(+),不太明白是要两个基因的信号肽都去掉还是去掉其中的一个?只知道该载体上面没有信号肽,请说的具体些
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖置顶 ( 共有1个 )

hdfish860907

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 小周 at 2012-03-27 10:38:39:
要是做外泌的话,一定保留前面一个基因的信号肽,把后面的基因的信号肽去除。

你好,我们是打算构建质粒后直接注射动物,然后做攻毒保护实验,检测DNA疫苗的免疫保护率,请问大侠能给一些好的建议吗?按道理说我的应该是做外分泌蛋白用的,我打算用重叠延伸剪切技术来融合两个目标基因,你提的建议有没有这方面的参考资料或者依据什么的,望解答!
5楼2012-03-28 22:17:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

glucidum

金虫 (正式写手)

这个是哺乳细胞表达载体,我不太了解。
通常在真菌中表达时,一般会去掉原来的信号肽,主要是担心原来的信号肽会干扰蛋白外分泌。
我想,你需要告诉大家你是想要得到融合蛋白,还是想让融合蛋白在细胞内表达,研究相关生物学功能。
希望有了解哺乳细胞表达的虫子可以解答你的问题。
2楼2012-03-27 08:33:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

超然渡陈

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
要不要信号肽是要看你研究蛋白的什么功能。要是做蛋白定位的话肯定是需要信号肽了。只是想得到融合蛋白的话就去掉信号肽只表达成熟肽,目的蛋白留在细胞内比分泌到胞外更容易获取。
3楼2012-03-27 09:51:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小周

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
要是做外泌的话,一定保留前面一个基因的信号肽,把后面的基因的信号肽去除。
4楼2012-03-27 10:38:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hdfish860907

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 超然渡陈 at 2012-03-27 09:51:40:
要不要信号肽是要看你研究蛋白的什么功能。要是做蛋白定位的话肯定是需要信号肽了。只是想得到融合蛋白的话就去掉信号肽只表达成熟肽,目的蛋白留在细胞内比分泌到胞外更容易获取。

我是打算用融合的DNA质粒直接注射动物体,做攻毒保护实验检测其免疫保护率,也就是DNA疫苗,请问能给我一些建议吗?
6楼2012-03-28 22:23:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

谢铮

至尊木虫 (著名写手)

爱分子爱实验

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
hdfish860907: 金币+1, 有帮助 2012-03-30 18:04:36
信号肽可以报成你合成的成熟蛋白被运送到细胞以外,是分泌蛋白必须的。但是如果你只是为了得到该蛋白,可以切掉信号肽序列,这样直接可从细胞内提取出来。
看了你的用途,认为应该保留信号肽。
博学好友张弛有度
7楼2012-03-29 20:35:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wen1023tao

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
hdfish860907: 金币+1, 有帮助 2012-03-30 18:03:15
以你的实验目的及信号肽类型来定,如果你做外分泌表达,而且信号肽是引导蛋白分泌出去的,就没必要去除,如果你不是做外分泌表达,也就是想你的表达蛋白留在胞类,信号肽应应该去除了,尽量使表达的蛋白在胞质中,而不是被转运到其他地方了,还有就是一般保留一个信号肽就OK了,N端C端都可以,只要在转运过程中能起作用
8楼2012-03-30 09:02:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 hdfish860907 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 268分085602化学工程调剂 +28 月照花林。 2026-04-09 28/1400 2026-04-12 02:38 by 秋豆菜芽
[考研] 280求调剂 +13 wzzz王 2026-04-09 13/650 2026-04-12 00:31 by 勇攀高峰0126
[考研] 调剂 +6 青灯不负 2026-04-09 6/300 2026-04-11 20:35 by dongdian1
[考研] 求调剂 +13 张番茄不炒蛋 2026-04-10 14/700 2026-04-11 16:02 by vgtyfty
[考研] 308求调剂 +3 VvvvL 2026-04-10 3/150 2026-04-11 15:32 by xiangxu
[考研] 求调剂 +6 archer.. 2026-04-09 8/400 2026-04-11 10:55 by zhq0425
[考研] 085500求调剂材料 +10 易11122 2026-04-09 10/500 2026-04-11 10:39 by maddjdld
[考研] 085410-273求调剂 +6 X1999 2026-04-10 6/300 2026-04-11 10:32 by Delta2012
[考研] 302分求调剂 +9 凡语祈愿 2026-04-08 10/500 2026-04-10 23:26 by 314126402
[考研] 吉大计算机技术331分,英语六级,求调剂 +3 峰峰021116 2026-04-09 3/150 2026-04-10 20:01 by chemisry
[考研] 计算机类求调剂,22408-274分 +7 上岸de小虫 2026-04-09 8/400 2026-04-10 19:56 by fxue1114
[考研] 293调剂 +25 yj1221 2026-04-08 26/1300 2026-04-10 15:02 by 柴小白
[考研] 青岛科技大学材料学院,环境学院调剂补录4月10日以前都可以 +3 1青科大。 2026-04-09 5/250 2026-04-10 09:58 by 翩翩一书生
[考研] 材料与化工专硕306分找合适调剂 +27 沧海轻舟e 2026-04-06 28/1400 2026-04-08 22:06 by wdyheheeh
[考研] 电子信息346 +4 zuoshaodian 2026-04-08 4/200 2026-04-08 11:54 by zzucheup
[考研] 263分B区求调剂 +6 李nihao 2026-04-08 6/300 2026-04-08 09:38 by 南开小綦
[考研] 323求调剂 +3 林zlu 2026-04-07 4/200 2026-04-07 23:21 by lbsjt
[考研] 312求调剂 +4 LR6 2026-04-06 4/200 2026-04-07 08:42 by jp9609
[考研] 求调剂 +7 张.1 2026-04-05 7/350 2026-04-05 20:40 by 啵啵啵0119
[考研] 277求调剂 +5 考研调剂lxh 2026-04-05 5/250 2026-04-05 19:03 by chy09050039
信息提示
请填处理意见