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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 两个基因融合构建真核表达载体需要去掉信号肽吗?
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hdfish860907

铁虫 (初入文坛)

[求助] 两个基因融合构建真核表达载体需要去掉信号肽吗?

用的是真核表达载体PCDNA3.1(+)，不太明白是要两个基因的信号肽都去掉还是去掉其中的一个？只知道该载体上面没有信号肽，请说的具体些
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1楼 2012-03-24 19:25:18
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hdfish860907

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 小周 at 2012-03-27 10:38:39:
要是做外泌的话，一定保留前面一个基因的信号肽，把后面的基因的信号肽去除。

你好，我们是打算构建质粒后直接注射动物，然后做攻毒保护实验，检测DNA疫苗的免疫保护率，请问大侠能给一些好的建议吗？按道理说我的应该是做外分泌蛋白用的，我打算用重叠延伸剪切技术来融合两个目标基因，你提的建议有没有这方面的参考资料或者依据什么的，望解答！
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5楼2012-03-28 22:17:57
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普通回帖

glucidum

金虫 (正式写手)
这个是哺乳细胞表达载体，我不太了解。
通常在真菌中表达时，一般会去掉原来的信号肽，主要是担心原来的信号肽会干扰蛋白外分泌。
我想，你需要告诉大家你是想要得到融合蛋白，还是想让融合蛋白在细胞内表达，研究相关生物学功能。
希望有了解哺乳细胞表达的虫子可以解答你的问题。
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2楼2012-03-27 08:33:56
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超然渡陈

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
要不要信号肽是要看你研究蛋白的什么功能。要是做蛋白定位的话肯定是需要信号肽了。只是想得到融合蛋白的话就去掉信号肽只表达成熟肽，目的蛋白留在细胞内比分泌到胞外更容易获取。
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3楼2012-03-27 09:51:40
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小周

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
要是做外泌的话，一定保留前面一个基因的信号肽，把后面的基因的信号肽去除。
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4楼2012-03-27 10:38:39
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hdfish860907

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 超然渡陈 at 2012-03-27 09:51:40:
要不要信号肽是要看你研究蛋白的什么功能。要是做蛋白定位的话肯定是需要信号肽了。只是想得到融合蛋白的话就去掉信号肽只表达成熟肽，目的蛋白留在细胞内比分泌到胞外更容易获取。

我是打算用融合的DNA质粒直接注射动物体，做攻毒保护实验检测其免疫保护率，也就是DNA疫苗，请问能给我一些建议吗？
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6楼2012-03-28 22:23:25
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谢铮

至尊木虫 (著名写手)

爱分子爱实验

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
hdfish860907: 金币+1, ★有帮助 2012-03-30 18:04:36
信号肽可以报成你合成的成熟蛋白被运送到细胞以外，是分泌蛋白必须的。但是如果你只是为了得到该蛋白，可以切掉信号肽序列，这样直接可从细胞内提取出来。
看了你的用途，认为应该保留信号肽。
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博学好友张弛有度
7楼2012-03-29 20:35:36
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wen1023tao

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
hdfish860907: 金币+1, ★有帮助 2012-03-30 18:03:15
以你的实验目的及信号肽类型来定，如果你做外分泌表达，而且信号肽是引导蛋白分泌出去的，就没必要去除，如果你不是做外分泌表达，也就是想你的表达蛋白留在胞类，信号肽应应该去除了，尽量使表达的蛋白在胞质中，而不是被转运到其他地方了，还有就是一般保留一个信号肽就OK了，N端C端都可以，只要在转运过程中能起作用
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8楼2012-03-30 09:02:12
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