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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » DH5α能否表达外源蛋白
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zhougama

禁虫 (正式写手)
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1楼 2011-07-15 19:33:11
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gwbk

木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★
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scelab(金币+5): 谢谢交流 2011-07-15 22:08:21
DH5a
F- endA1 glnV44 thi-1 recA1 relA1 gyrA96 deoR nupG Φ80dlacZΔM15 Δ(lacZYA-argF)U169, hsdR17(rK- mK+), λ–
从基因型上来看，DH5a并不缺乏表达相关基因（这个确实不能缺），只是修饰限制系统hsdR17(rK- mK+)：限制缺陷，修饰正常，可使DNA甲基化，但不限制外源DNA 。

DH5a应该可以表达，要不然质粒上的抗性基因不表达菌就不能生长了。只不过是表达量的问题。我觉得可以表达的~我现在正在做这个，我直接用DH5a筛选抗性基因（筛选总可以吧）~以前没用过DH5a做抗性筛选。
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2楼2011-07-15 20:45:43
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zhougama

禁虫 (正式写手)
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3楼2011-07-15 21:59:42
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amose

银虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
对于真核基因，可能不会表达，毕竟转录翻译中有很多修饰不同
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路漫漫其修远兮，吾将上下而求索
4楼2011-07-15 22:13:11
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jinkui960

至尊木虫 (知名作家)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
scelab(金币+1): 实践出真知，呵呵~ 2011-07-16 09:01:55
我觉得应该可以表达，有一次我们把GFP的序列克隆到T载体，转化到DH5α中以后，菌体都变绿了，呵呵！
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5楼2011-07-15 22:53:04
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
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scelab(金币+7, EPI+1): 谢谢热心交流 2011-07-16 09:01:35
可以表达，我用过的我100%确定！

我曾经提取过牛瘤胃内容物的宏基因组DNA，经过回收大片段之后与cosmid载体pWEB:TNC连接，转染大肠杆菌，原本没有带有任何质粒的DH5α，涂板，筛选纤维素酶基因时用的就是活性筛选法，筛选得到内切酶和葡萄糖苷酶若干。淀粉酶我没有筛选，但是师兄筛选得到过。

pWEB:TNC是克隆载体，不是表达载体，但是启动子是大肠杆菌可以识别的，所以表达起来完全没有问题。怕就怕真核生物的基因启动子不识别而已，原核的大概是可以的，虽然很难说是不是全部外源基因都可以表达。

DH5α也是克隆宿主，体内没有外源质粒，更不用说稀有密码子了，但是只要识别了启动子，多少都还是可以表达的。JM系列的克隆宿主也是可以表达的。

只要能识别启动子，应该是无论宿主是那个大肠杆菌菌株都能表达，就是表达出来有没有活性或者被不被降解的问题。

[ Last edited by 冼亮淀粉酶 on 2011-7-16 at 01:29 ]
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
6楼2011-07-16 01:13:30
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xulanzzz

金虫 (著名写手)
★
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可以表达，我们一般构建好质粒，可以做一个粗略的蛋白电泳，看看表达有没有问题，从而确定质粒构建有没有问题。。。
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DOBEST
7楼2011-07-17 20:16:30
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zhougama

禁虫 (正式写手)
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8楼2011-07-17 21:26:54
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lumenzi

木虫 (初入文坛)
★
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大肠杆菌用的最多的是pet表达载体，如果选用pet系列的话肯定不能用DH5a，具体的原因可以看pet的说明书，至于其他的载体，本人没用过，不大了解。
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9楼2011-07-17 21:57:14
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hkfgwww

银虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
肯弟可以的，只是量的问题了。能用别的就用别的吧，毕竟它是一个克隆载体。
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微生物发酵
10楼2011-07-19 22:32:13
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