应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » DH5α能否表达外源蛋白
161/2返回列表12下一页
查看: 4670  |  回复: 15
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MicEPI ，点击这里进行查看

zhougama

禁虫 (正式写手)
本帖内容被屏蔽

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-07-15 19:33:11
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gwbk

木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
scelab(金币+5): 谢谢交流 2011-07-15 22:08:21
DH5a
F- endA1 glnV44 thi-1 recA1 relA1 gyrA96 deoR nupG Φ80dlacZΔM15 Δ(lacZYA-argF)U169, hsdR17(rK- mK+), λ–
从基因型上来看，DH5a并不缺乏表达相关基因（这个确实不能缺），只是修饰限制系统hsdR17(rK- mK+)：限制缺陷，修饰正常，可使DNA甲基化，但不限制外源DNA 。

DH5a应该可以表达，要不然质粒上的抗性基因不表达菌就不能生长了。只不过是表达量的问题。我觉得可以表达的~我现在正在做这个，我直接用DH5a筛选抗性基因（筛选总可以吧）~以前没用过DH5a做抗性筛选。
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2011-07-15 20:45:43
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhougama

禁虫 (正式写手)
本帖内容被屏蔽
3楼2011-07-15 21:59:42
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

amose

银虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
对于真核基因，可能不会表达，毕竟转录翻译中有很多修饰不同
赞一下(1人) 回复此楼
路漫漫其修远兮，吾将上下而求索
4楼2011-07-15 22:13:11
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jinkui960

至尊木虫 (知名作家)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
scelab(金币+1): 实践出真知，呵呵~ 2011-07-16 09:01:55
我觉得应该可以表达，有一次我们把GFP的序列克隆到T载体，转化到DH5α中以后，菌体都变绿了，呵呵！
赞一下(2人) 回复此楼
5楼2011-07-15 22:53:04
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
scelab(金币+7, EPI+1): 谢谢热心交流 2011-07-16 09:01:35
可以表达，我用过的我100%确定！

我曾经提取过牛瘤胃内容物的宏基因组DNA，经过回收大片段之后与cosmid载体pWEB:TNC连接，转染大肠杆菌，原本没有带有任何质粒的DH5α，涂板，筛选纤维素酶基因时用的就是活性筛选法，筛选得到内切酶和葡萄糖苷酶若干。淀粉酶我没有筛选，但是师兄筛选得到过。

pWEB:TNC是克隆载体，不是表达载体，但是启动子是大肠杆菌可以识别的，所以表达起来完全没有问题。怕就怕真核生物的基因启动子不识别而已，原核的大概是可以的，虽然很难说是不是全部外源基因都可以表达。

DH5α也是克隆宿主，体内没有外源质粒，更不用说稀有密码子了，但是只要识别了启动子，多少都还是可以表达的。JM系列的克隆宿主也是可以表达的。

只要能识别启动子，应该是无论宿主是那个大肠杆菌菌株都能表达，就是表达出来有没有活性或者被不被降解的问题。

[ Last edited by 冼亮淀粉酶 on 2011-7-16 at 01:29 ]
赞一下(3人) 回复此楼
流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
6楼2011-07-16 01:13:30
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xulanzzz

金虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
可以表达，我们一般构建好质粒，可以做一个粗略的蛋白电泳，看看表达有没有问题，从而确定质粒构建有没有问题。。。
赞一下(1人) 回复此楼
DOBEST
7楼2011-07-17 20:16:30
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhougama

禁虫 (正式写手)
本帖内容被屏蔽
8楼2011-07-17 21:26:54
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lumenzi

木虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
大肠杆菌用的最多的是pet表达载体，如果选用pet系列的话肯定不能用DH5a，具体的原因可以看pet的说明书，至于其他的载体，本人没用过，不大了解。
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2011-07-17 21:57:14
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hkfgwww

银虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
肯弟可以的，只是量的问题了。能用别的就用别的吧，毕竟它是一个克隆载体。
赞一下(1人) 回复此楼
微生物发酵
10楼2011-07-19 22:32:13
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 zhougama 的主题更新
161/2返回列表12下一页
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +6 angus9576 2026-08-17 11/550 2026-08-17 23:57 by angus9576
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +8 wangze12014 2026-08-14 10/500 2026-08-17 17:05 by xter9665
[基金申请] 时间戳变了，能看出什么问题？ +4 基诺咪客 2026-08-17 4/200 2026-08-17 16:10 by Vivilian
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜？ +12 Ldrop2023 2026-08-13 15/750 2026-08-17 15:02 by 小豌豆_发芽
[基金申请] 今天系统多次维护，明天很可能放榜！ +8 zju2000 2026-08-16 9/450 2026-08-17 12:20 by lmz0216
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +13 archvillain 2026-08-15 25/1250 2026-08-16 20:13 by zhaosm1982
[基金申请] 2027广东省杰青 +3 奶牛小黑 2026-08-15 6/300 2026-08-16 20:07 by 奶牛小黑
[基金申请] 快农历七夕节了，轻松一下，男人悄悄话，女施主请不要进来。 +3 Tide man 2026-08-14 3/150 2026-08-16 17:47 by jurkat.1640
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 26/1300 2026-08-16 12:35 by 启萌科技
[基金申请] 有时候，自然基金真的不能太认真 （我的申报经验） +10 majunge000 2026-08-11 12/600 2026-08-16 08:18 by xli1984
[精细化工] 招聘 金属平磨液，抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] 各位道友，我要去昆明玩几天，回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果？ +4 yuleib84 2026-08-11 4/200 2026-08-14 23:05 by lfy8008
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] 重要来源：本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] Filecode 又变了，巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +4 布布和一二 2026-08-11 5/250 2026-08-13 12:56 by cratir
[基金申请] 结合人工智能，周易传统文化，filecode打分制来了，3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见，大家看看几个A，几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭