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易水寒明

银虫 (小有名气)

[交流] 大家说说大肠杆菌表达菌株一般最大能表达多少kd的蛋白质？ 已有5人参与

大家说说大肠杆菌表达菌株一般最大能表达多少kd的蛋白质？我要表达的蛋白质大概180kd，基因片段4000bp左右，能表达出有活性的蛋白吗？求解
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1楼 2013-08-02 14:56:45
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bleach060452

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
都180了，表达都玄乎，还想有活性，你太贪心了
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岂能尽如人意，但求无愧我心
2楼2013-08-02 17:03:53
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547star

木虫 (著名写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
amisking: 金币+1, 鼓励发帖交流！ 2013-08-02 21:54:38
做了才知道。蛋白质越大越容易得到有活性的蛋白，只是表达量可能不高。
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为什么
3楼2013-08-02 20:28:34
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Sthunder

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-08-14 17:33:45
主要取决于蛋白性质，180还是有可能表达的，Good luck！
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互助互励，共奋共进！！
4楼2013-08-02 22:33:30
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crystalatom

木虫 (小有名气)
★ ★ ★
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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-08-14 17:33:56
PDB里面有用e. coli表达1000 a.a.的，e. coli 自己能表达的有到200 kDa的，不过外源表达180kDa比较难。看你用来做什么。
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5楼2013-08-02 23:49:32
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929519755

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-08-14 17:34:08
大肠一般最适合表达的蛋白大小是20到90KDa，目的蛋白过大不好表达。你看看你的蛋白糖基化位点多不多，如果多的话基本就没戏。还有你看看二硫键多不，如果多，形成的蛋白可能以包涵体形式存在。
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想你没话说
6楼2013-08-03 07:51:55
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易水寒明

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by bleach060452 at 2013-08-02 17:03:53
都180了，表达都玄乎，还想有活性，你太贪心了

那该怎么办啊？我质粒都构建了好久了，还没有连接上
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7楼2013-08-14 15:16:49
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易水寒明

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 547star at 2013-08-02 20:28:34
做了才知道。蛋白质越大越容易得到有活性的蛋白，只是表达量可能不高。

谢谢
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8楼2013-08-14 15:17:08
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易水寒明

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by Sthunder at 2013-08-02 22:33:30
主要取决于蛋白性质，180还是有可能表达的，Good luck！

都不想表达了，实在不行用哺乳动物细胞表达，也能纯化吧?
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9楼2013-08-14 15:17:46
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易水寒明

银虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 929519755 at 2013-08-03 07:51:55
大肠一般最适合表达的蛋白大小是20到90KDa，目的蛋白过大不好表达。你看看你的蛋白糖基化位点多不多，如果多的话基本就没戏。还有你看看二硫键多不，如果多，形成的蛋白可能以包涵体形式存在。

那请问用哺乳动物细胞表达，用免疫沉淀纯化行不行啊？我用来做体外激酶反应测试的。
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10楼2013-08-14 15:19:00
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