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20025405木虫 (正式写手)
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[交流]
【求助/交流】大肠杆菌有的是表达载体的宿主，有些事克隆载体的宿主，他们的区别在哪� 已有9人参与
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| 大肠杆菌有的是表达载体的宿主，有些事克隆载体的宿主，他们的区别在哪？克隆载体的宿主（JM109或NM522）可以用来作为表达载体的宿主吗？ |
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jhu132llh
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rainwander(金币+2, EPI+1): 鼓励交流~~~ 2011-04-05 19:20:42
rainwander(金币+2, EPI+1): 鼓励交流~~~ 2011-04-05 19:20:42
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表达载体也许可以用来做克隆载体 但是克隆载体一般是不能用来做表达载体的 原因如下： 例如：克隆载体DH5α有DNA酶缺陷，适合用于克隆（质粒DNA不容易被干掉，可以过量复制），而表达载体BL21貌似是有蛋白酶缺陷，适合用于表达。 酶切、连接之后，不能保证片段一定连上去，所以需要一个验证的过程，这就需要提质粒。所以先把连接产物转化到DH5α，挑选单菌落，然后验证。 就是说，如果你需要把外源片段插入质粒里，那在酶切、连接之后，先把重组质粒转化到DH5α里面，然后筛选转化子（例如，提质粒后酶切验证、PCR验证等等）；筛选到含有正确的重组质粒的转化子后，再摇菌，把重组质粒提出来，转化到BL21里面，用于诱导表达蛋白质。 参考链接：http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=3037957&fpage=1 |
4楼2011-04-05 17:49:04
newtime007
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2楼2011-04-05 16:11:03
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rainwander
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5楼2011-04-05 19:22:31
20025405
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6楼2011-04-06 10:17:33
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我不是楼主
7楼2011-04-06 18:13:43
8楼2011-04-07 08:26:45
rambo1980
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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
rainwander(金币+2, EPI+1): 鼓励交流~~~ 2011-04-07 15:42:16
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我没有尝试过用克隆宿主细胞进行表达，或者用表达宿主细胞进行克隆，所以下面的讨论仅以我所掌握的理论知识为基础。按照我的理解： 1、克隆载体应该用克隆载体的宿主进行转化。 如进行蓝白斑筛选时，需要lacZ△M15的基因型。 2、表达载体应该用表达载体的宿主进行转化。 如pET载体系统，需要宿主菌基因组中有lac promoter驱动的T7 RNA pol基因，才能转录外源目的基因基因。 楼主的问题，以前我也有过疑问，可惜知识浅薄。我觉得要想真正搞懂，需要全面了解宿主基因型，希望楼下的网友不吝赐教！！！ |
9楼2011-04-07 09:13:04
602059625
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10楼2011-04-07 19:21:27
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