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wkl1984

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[求助] 如何筛选宿主菌？

分离一种大肠杆菌，是鉴定为大肠杆菌的，将质粒转到这种大肠杆菌，但是没有转化成功，该大肠杆菌不具有质粒所带的抗性，转化是常用的Cacl2法，浓度为0.1mol/l。不知道大家如何选择宿主菌的？有哪些注意事项？

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1楼 2011-05-20 13:34:49

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brightfuture01

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【答案】应助回帖

★ ★ ★
wkl1984(金币+1): 2011-05-20 15:35:28
silicare(金币+3, EPI+1): 2011-05-20 18:19:21

我们平时使用的感受态细胞都是经过改造的大肠杆菌，其中的限制性酶切系统都是缺失的，不会对转进去的质粒进行切割。

你在这儿转野生型的，哪里能保证是基因缺失的。。。不成功很正常。。。

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The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.

2楼2011-05-20 13:44:36

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wkl1984

金虫 (小有名气)

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引用回帖:

Originally posted by brightfuture01 at 2011-05-20 13:44:36:
我们平时使用的感受态细胞都是经过改造的大肠杆菌，其中的限制性酶切系统都是缺失的，不会对转进去的质粒进行切割。

你在这儿转野生型的，哪里能保证是基因缺失的。。。不成功很正常。。。

那就需要将野生菌进行改造，使它对质粒没有修饰和限制，这就意味着首先要知道野生型大肠杆菌的的序列，然后把它进行必须的改造，是这样吗？你能不能给我一下你们是如何改造的范例吗？

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3楼2011-05-20 15:40:26

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