| 查看: 1489 | 回复: 4 | ||||
| 本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看 | ||||
[求助]
关于野生菌为宿主表达的三亲结合法
|
||||
| 我现在在污水中分离出一株枯草芽孢杆菌，我现在想把我分离的外源基因转入此菌中，我看现在网上资源有些做野生菌的表达用的是三亲结合法，就是，供体菌、辅助菌、受体菌三种菌混合培养的一种广法，但是这方面的资源特别的少，我想知道这种方法中用的载体哪种比较好，是用的大肠表达载体、枯草表达载体还是穿梭表达载体。就是除了三亲结合法，之外还有没有好的构建工程菌的方法了。谢谢了，我才来不久金币有些少，请大家多包涵了。 |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 【分子生物】EPI帖 | 微生物+英语+情商=？ |
» 猜你喜欢
留学--博士招生
已经有16人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有158人回复
-
湖北师范大学招调剂啦
已经有7人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
-
天津商业大学 生物与医药课题组招生
已经有0人回复
-
生物化工学硕招收调剂
已经有0人回复
-
广东石油化工学院2026年硕士研究生需要多名生物，制药工程，食品专业的调剂生
已经有0人回复
-
317分 一志愿江南大学 化学工程学硕 求调剂
已经有6人回复
-
化工申博
已经有3人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 微生物学考研资料1(沈萍版同步）免币分享
已经有67人回复
2楼2011-08-24 09:30:28
天使托
专家顾问 (职业作家)
T.Shen
-
专家经验: +57 - MolEPI: 106
- 应助: 95 (初中生)
- 贵宾: 0.263
- 金币: 16348.8
- 散金: 593
- 红花: 74
- 沙发: 9
- 帖子: 3652
- 在线: 289小时
- 虫号: 441757
- 注册: 2007-10-27
- 专业: 微生物生理与生物化学
- 管辖: 微生物
3楼2011-08-24 09:56:16
Petter_JDW
木虫 (小有名气)
- MolEPI: 2
- 应助: 7 (幼儿园)
- 金币: 3493.5
- 散金: 1528
- 红花: 6
- 帖子: 274
- 在线: 429.5小时
- 虫号: 1349191
- 注册: 2011-07-18
- 性别: GG
- 专业: 乳腺肿瘤
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★
dhd997(金币+5, MolEPI+1): good 2011-08-25 07:48:09
铅钋锶钇(金币+10): 2011-08-29 10:28:10
dhd997(金币+5, MolEPI+1): good 2011-08-25 07:48:09
铅钋锶钇(金币+10): 2011-08-29 10:28:10
|
芽孢杆菌属的一般比较难转化得了~我们实验室通常用一下方法~希望能对你有用 ①取受体菌接种于BY培养液中，37℃培养到对数生长早中期。此时OD620应在0.4左右，培养时间约为4～5小时。 ②将培养后的菌液离心，弃去上清液，再用生长培养基（GM液）洗菌一次，然后将菌体细胞重新悬浮在与BY培养液等体积的GM液中。37℃继续振荡培养到对数生长后期。此时OD620应在0.6～0.9，培养时间约为3～5小时。 ③以1:10的比例将GM液中培养的菌液稀释于转化培养基（TM液）中。即取菌液0.2ml加入1.8mlTM液中，在20×150mm的试管中，37℃振荡培养90分钟。 ④加入供体质粒，至最终浓度1ug/ml，于20×150mm的试管中，37℃振荡培养30分钟。 ⑤取200ul涂布抗性选择平板，37℃培养48小时。 【培养基配方】 A. BY培养基：牛肉膏5g，酵母膏5g，蛋白胨10g，氯化钠5g，葡萄糖5g，蒸馏水1000ml，pH7.5。 B. 1×最低盐溶液：K2HPO4 14g（K2HPO4•3H2O 18.34g），K2HPO4 6g，(NH4)2SO4 2g，柠檬酸钠（Na3C6H5O7•2H2O）1g，MgSO4•7H2O 0.2g，在蒸馏水中依次溶解，加水至1000ml。 C. L- trp溶液，2mg/ml，贮于棕色瓶内，用黑纸包裹。（过滤灭菌） D. 生长培养基：GM，使用时混合比例。1×最低盐溶液100ml，1M硫酸镁0.5ml，50%葡萄糖1ml，5%水解酪蛋白0.4ml，10%酵母汁1ml，L-trp 50ug/ml。 E. 转化培养基：TM，使用时混合比例。1×最低盐溶液100ml，1M硫酸镁0.5ml，50%葡萄糖1ml，5%水解酪蛋白0.2ml，L-trp 5ug/ml。 其中 50% 葡萄糖 过滤灭菌 5%水解酪蛋白和10%酵母汁均可高温灭菌 至于载体你可以试试 pAX01这是一个适用于芽孢杆菌属的过表达载体  |
4楼2011-08-24 22:55:50
5楼2011-08-29 10:51:38
