应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于野生菌为宿主表达的三亲结合法
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
51/1返回列表
查看: 1487  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看

铅钋锶钇

银虫 (初入文坛)

[求助] 关于野生菌为宿主表达的三亲结合法

我现在在污水中分离出一株枯草芽孢杆菌，我现在想把我分离的外源基因转入此菌中，我看现在网上资源有些做野生菌的表达用的是三亲结合法，就是，供体菌、辅助菌、受体菌三种菌混合培养的一种广法，但是这方面的资源特别的少，我想知道这种方法中用的载体哪种比较好，是用的大肠表达载体、枯草表达载体还是穿梭表达载体。就是除了三亲结合法，之外还有没有好的构建工程菌的方法了。谢谢了，我才来不久金币有些少，请大家多包涵了。
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

【分子生物】EPI帖 微生物+英语+情商=？

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-08-24 09:29:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

铅钋锶钇

银虫 (初入文坛)
1949stone: 沙发 就让你自己占了 2011-08-24 20:13:29
лл
回复此楼
2楼2011-08-24 09:30:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): good 2011-08-24 10:55:30
根据楼主所描述的，应该是三亲株的方法，不知道你是要做什么？我们一般是做敲除用的，当然也有别的用途，所用载体穿梭载体就可以了，不过在协助菌里有一个协助的载体。。。
赞一下(1人) 回复此楼
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
3楼2011-08-24 09:56:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Petter_JDW

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
dhd997(金币+5, MolEPI+1): good 2011-08-25 07:48:09
铅钋锶钇(金币+10): 2011-08-29 10:28:10
芽孢杆菌属的一般比较难转化得了~我们实验室通常用一下方法~希望能对你有用


①取受体菌接种于BY培养液中，37℃培养到对数生长早中期。此时OD620应在0.4左右，培养时间约为4～5小时。
②将培养后的菌液离心，弃去上清液，再用生长培养基（GM液）洗菌一次，然后将菌体细胞重新悬浮在与BY培养液等体积的GM液中。37℃继续振荡培养到对数生长后期。此时OD620应在0.6～0.9，培养时间约为3～5小时。
③以1:10的比例将GM液中培养的菌液稀释于转化培养基（TM液）中。即取菌液0.2ml加入1.8mlTM液中，在20×150mm的试管中，37℃振荡培养90分钟。
④加入供体质粒，至最终浓度1ug/ml，于20×150mm的试管中，37℃振荡培养30分钟。
⑤取200ul涂布抗性选择平板，37℃培养48小时。
【培养基配方】
A.        BY培养基：牛肉膏5g，酵母膏5g，蛋白胨10g，氯化钠5g，葡萄糖5g，蒸馏水1000ml，pH7.5。
B.        1×最低盐溶液：K2HPO4 14g（K2HPO4•3H2O 18.34g），K2HPO4 6g，(NH4)2SO4 2g，柠檬酸钠（Na3C6H5O7•2H2O）1g，MgSO4•7H2O 0.2g，在蒸馏水中依次溶解，加水至1000ml。
C.        L- trp溶液，2mg/ml，贮于棕色瓶内，用黑纸包裹。（过滤灭菌）
D.        生长培养基：GM，使用时混合比例。1×最低盐溶液100ml，1M硫酸镁0.5ml，50%葡萄糖1ml，5%水解酪蛋白0.4ml，10%酵母汁1ml，L-trp 50ug/ml。
E.        转化培养基：TM，使用时混合比例。1×最低盐溶液100ml，1M硫酸镁0.5ml，50%葡萄糖1ml，5%水解酪蛋白0.2ml，L-trp 5ug/ml。

其中 50% 葡萄糖 过滤灭菌   5%水解酪蛋白和10%酵母汁均可高温灭菌
至于载体你可以试试 pAX01这是一个适用于芽孢杆菌属的过表达载体
赞一下(2人) 回复此楼
4楼2011-08-24 22:55:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

铅钋锶钇

银虫 (初入文坛)
谢谢，
回复此楼
5楼2011-08-29 10:51:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 铅钋锶钇 的主题更新
51/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 348求调剂 +3 车厘子zzz 2026-04-05 3/150 2026-04-05 20:30 by 啵啵啵0119
[考研] 一志愿 南京航空航天大学 ，080500材料科学与工程学硕 +10 @taotao 2026-03-30 10/500 2026-04-05 17:57 by jj987
[考研] 考研生物学考A区211，初试322，科目生化和生物综合，求调剂 +6 。。。54 2026-04-03 6/300 2026-04-05 14:54 by JOKER0401
[考研] 材料与化工363求推荐 +7 zh096 2026-04-04 7/350 2026-04-05 09:11 by 陌秋26
[考研] 309分085801求调剂 +11 MY_angel 2026-03-31 11/550 2026-04-04 19:11 by 蓝云思雨
[考研] 309求调剂 +6 刘刘刘1231 2026-04-02 7/350 2026-04-04 13:41 by liucky
[考研] 334求调剂 +8 曾仰之 2026-04-03 8/400 2026-04-04 11:16 by w_xuqing
[考研] 材料科学与工程考研 +10 拯救皮特托先生 2026-04-02 10/500 2026-04-03 23:57 by userper
[考研] 数二英二348求调剂 +4 hxdzj1 2026-04-03 5/250 2026-04-03 21:25 by zhq0425
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +5 崔wj 2026-04-03 5/250 2026-04-03 15:06 by arrow8852
[考研] 生物学求调剂 +3 15064154688 2026-04-03 3/150 2026-04-03 10:28 by macy2011
[考研] 求调剂22408 288分 +5 new382 2026-04-02 5/250 2026-04-03 09:13 by 醉在风里
[考研] 求调剂 +7 Aniyaio 2026-04-02 7/350 2026-04-02 16:42 by zzsw+
[考研] 283求调剂 +3 jiouuu 2026-04-02 4/200 2026-04-02 14:08 by 哒哒哒呱呱呱
[考研] 266求调剂 +4 学员97LZgn 2026-04-02 4/200 2026-04-02 13:03 by yulian1987
[考研] 一志愿北交大材料工程总分358 +8 cs0106 2026-04-01 9/450 2026-04-02 10:36 by 不吃魚的貓
[考研] 322求调剂 +5 熹僖XX 2026-03-31 6/300 2026-04-02 10:08 by 求调剂zz
[考博] 26年申博 +3 staryer 2026-03-30 4/200 2026-04-01 23:21 by ai4pharm
[考研] 一志愿西安交大材料学硕（英一数二）347，求调剂到高分子/材料相关专业 +7 zju51 2026-03-31 9/450 2026-04-01 19:35 by CFQZAFU
[考研] 抱歉 +3 田洪有 2026-03-30 3/150 2026-03-30 19:11 by 迷糊CCPs
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭