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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】大肠杆菌有的是表达载体的宿主，有些事克隆载体的宿主，他们的区别在哪�
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jhu132llh

荣誉版主 (知名作家)

大洪
★ ★
rainwander(金币+2, EPI+1): 鼓励交流~~~ 2011-04-05 19:20:42
表达载体也许可以用来做克隆载体
但是克隆载体一般是不能用来做表达载体的
原因如下：
例如：克隆载体DH5α有DNA酶缺陷，适合用于克隆（质粒DNA不容易被干掉，可以过量复制），而表达载体BL21貌似是有蛋白酶缺陷，适合用于表达。

酶切、连接之后，不能保证片段一定连上去，所以需要一个验证的过程，这就需要提质粒。所以先把连接产物转化到DH5α，挑选单菌落，然后验证。

就是说，如果你需要把外源片段插入质粒里，那在酶切、连接之后，先把重组质粒转化到DH5α里面，然后筛选转化子（例如，提质粒后酶切验证、PCR验证等等）；筛选到含有正确的重组质粒的转化子后，再摇菌，把重组质粒提出来，转化到BL21里面，用于诱导表达蛋白质。

参考链接：http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=3037957&fpage=1
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青春的岁月，我们身不由己，只因这胸中燃烧的梦想！
4楼2011-04-05 17:49:04
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智能机器人

Robot (super robot)

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rambo1980

金虫 (小有名气)
★ ★ ★
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rainwander(金币+2, EPI+1): 鼓励交流~~~ 2011-04-07 15:42:16
我没有尝试过用克隆宿主细胞进行表达，或者用表达宿主细胞进行克隆，所以下面的讨论仅以我所掌握的理论知识为基础。按照我的理解：
1、克隆载体应该用克隆载体的宿主进行转化。
      如进行蓝白斑筛选时，需要lacZ△M15的基因型。
2、表达载体应该用表达载体的宿主进行转化。
      如pET载体系统，需要宿主菌基因组中有lac promoter驱动的T7 RNA pol基因，才能转录外源目的基因基因。
      楼主的问题，以前我也有过疑问，可惜知识浅薄。我觉得要想真正搞懂，需要全面了解宿主基因型，希望楼下的网友不吝赐教！！！
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9楼2011-04-07 09:13:04
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