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20025405

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】大肠杆菌有的是表达载体的宿主，有些事克隆载体的宿主，他们的区别在哪�已有9人参与

大肠杆菌有的是表达载体的宿主，有些事克隆载体的宿主，他们的区别在哪？克隆载体的宿主（JM109或NM522）可以用来作为表达载体的宿主吗？
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1楼2011-04-05 15:45:51
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

jhu132llh

荣誉版主 (知名作家)

大洪
★ ★
rainwander(金币+2, EPI+1): 鼓励交流~~~ 2011-04-05 19:20:42
表达载体也许可以用来做克隆载体
但是克隆载体一般是不能用来做表达载体的
原因如下：
例如：克隆载体DH5α有DNA酶缺陷，适合用于克隆（质粒DNA不容易被干掉，可以过量复制），而表达载体BL21貌似是有蛋白酶缺陷，适合用于表达。

酶切、连接之后，不能保证片段一定连上去，所以需要一个验证的过程，这就需要提质粒。所以先把连接产物转化到DH5α，挑选单菌落，然后验证。

就是说，如果你需要把外源片段插入质粒里，那在酶切、连接之后，先把重组质粒转化到DH5α里面，然后筛选转化子（例如，提质粒后酶切验证、PCR验证等等）；筛选到含有正确的重组质粒的转化子后，再摇菌，把重组质粒提出来，转化到BL21里面，用于诱导表达蛋白质。

参考链接：http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=3037957&fpage=1
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青春的岁月，我们身不由己，只因这胸中燃烧的梦想！
4楼2011-04-05 17:49:04
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普通回帖

newtime007

木虫 (正式写手)

成长的微生物
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
rainwander(金币+2): 鼓励交流~~~ 2011-04-05 19:21:09
克隆载体：是能够通过限制性内切酶，将目的DNA片段整合进去，并且能够转入宿主细胞进行表达的生物DNA。常见的有质粒，病毒，噬菌体等
表达载体：是用来连接植入基因的DNA链.
根据上述载体的定义可知大肠杆菌中的表达载体的宿主和克隆载体的宿主市有区别的，它们的培养、选择要与相应的的功能基因对应。
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上善若水，水善利万物而不争
2楼2011-04-05 16:11:03
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郝钊

金虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
rainwander(金币+1): 鼓励交流~~~ 2011-04-05 19:21:00
可能是有的菌株可以高效识别表达载体上的强启动子，另外一些则高效识别识别克隆载体上的复制起点，不同菌株有不同的特性。愚见
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3楼2011-04-05 16:35:39
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rainwander

铁杆木虫 (知名作家)

优秀版主
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by jhu132llh at 2011-04-05 17:49:04:
表达载体也许可以用来做克隆载体
但是克隆载体一般是不能用来做表达载体的
原因如下：
例如：克隆载体DH5α有DNA酶缺陷，适合用于克隆（质粒DNA不容易被干掉，可以过量复制），而表达载体BL21貌似是有蛋白酶缺 ...

我之前用过JM109做过表达宿主菌，并且成功了
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千万不要因为走的太久，而忘记了我们为什么出发~~~~~~ForDream~~~~~~
5楼2011-04-05 19:22:31
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20025405

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by rainwander at 2011-04-05 19:22:31:
我之前用过JM109做过表达宿主菌，并且成功了

楼主好强大
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6楼2011-04-06 10:17:33
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rainwander

铁杆木虫 (知名作家)

优秀版主
引用回帖:
Originally posted by 20025405 at 2011-04-06 10:17:33:
楼主好强大

我不是楼主
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千万不要因为走的太久，而忘记了我们为什么出发~~~~~~ForDream~~~~~~
7楼2011-04-06 18:13:43
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hkfgwww

银虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 20025405 at 2011-04-06 10:17:33:
楼主好强大

可以的啊，自己加入启动子就行了，克隆载体不就是缺少合适的启动子吗?
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微生物发酵
8楼2011-04-07 08:26:45
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rambo1980

金虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
rainwander(金币+2, EPI+1): 鼓励交流~~~ 2011-04-07 15:42:16
我没有尝试过用克隆宿主细胞进行表达，或者用表达宿主细胞进行克隆，所以下面的讨论仅以我所掌握的理论知识为基础。按照我的理解：
1、克隆载体应该用克隆载体的宿主进行转化。
      如进行蓝白斑筛选时，需要lacZ△M15的基因型。
2、表达载体应该用表达载体的宿主进行转化。
      如pET载体系统，需要宿主菌基因组中有lac promoter驱动的T7 RNA pol基因，才能转录外源目的基因基因。
      楼主的问题，以前我也有过疑问，可惜知识浅薄。我觉得要想真正搞懂，需要全面了解宿主基因型，希望楼下的网友不吝赐教！！！
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9楼2011-04-07 09:13:04
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602059625

金虫 (知名作家)
EPI给的有点水了
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[url=http://ip.WoTuLa.com][img]http://i.WoTuLa.com/note.png?name=填写姓名&say=这里填写您想说的内容。[/img][/url]
10楼2011-04-07 19:21:27
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