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1楼2010-06-10 11:25:57

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超然渡陈

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一般试剂盒提取的酵母质粒浓度都非常低，电泳10 ul也很难看到条带，用热激转化大肠杆菌时长不出来菌很正常。我们是提取的酵母质粒用电转化大肠杆菌，没出现长不出来的情况。实验室也有制备超级感受态转化酵母提取的质粒的，不过我觉得不是太必要。超级感受态的制备太麻烦，电转化已经能够满足要求。文献说电转化是热激转化效率的20-30倍，个人觉得没那么高，也就高5倍左右。

11楼2013-08-08 10:08:00

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susizheng

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我們是糖甜到憂傷

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是穿梭质粒的话，和大肠杆菌一般的质粒一样的转法，为啥就转不出来呢？

Thank-you，so-blue.

2楼2010-06-10 14:48:14

小周

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你说的详细一下吧，不太清楚！

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3楼2010-06-10 14:58:34

ben1147

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amisking(金币+3):欢迎分享经验！ 2010-06-10 22:18:22

如果不是穿梭质粒的话，质粒上没有大肠杆菌的复制起点，即使转进去也不能复制

如果是穿梭质粒的话，和普通质粒没有什么区别。

如果质粒比较大的话可能难转一些，也要注意质粒的质量。

另外楼主说的“转不出来”指什么，转进去不复制\不表达还是筛不到阳性克隆还是什么？

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4楼2010-06-10 15:16:22

jasco

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穿梭质粒肯定可以，看一下质粒图谱确定

5楼2010-06-10 16:19:52

xiangquanju

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谢谢大家的回复，是穿梭质粒，已经找到原因啦，是因为我从酵母中提取质粒的时候，没有用选择培养基，没有给一个选择压力，可能导致质粒的大量丢失，所以也许根本就没有提取出质粒来

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6楼2010-06-12 10:08:45

erin在榆中

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wanhscn(金币+3): 鼓励新虫多发贴！鼓励多来分子生物版！ 2011-10-28 18:03:51

我也遇到了这个问题……我使用缺陷型培养基摇培得到酵母，然后提的质粒。但热激转化大肠杆菌DH5α（42° 90s），完全没有长出菌斑……很是忧伤……我怀疑是质粒提取浓度太低，杂质太多。请问楼主是如何进行酵母质粒提取的？本人邮箱，gongxue.erin@gmail.com 望不吝赐教

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7楼2011-10-28 00:08:50

liwu2223

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楼主，你的实验咋样了啊？提酵母质粒转大肠，成功没有啊？

天未降大任于斯，我也苦其心智，劳其筋骨！

8楼2011-11-21 13:33:39

jzyzqbx

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酿酒酵母的质粒拷贝数本来就很低，我转的长得不多

9楼2011-11-22 10:30:30

17xlonly

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引用回帖:

7楼: Originally posted by erin在榆中 at 2011-10-28 00:08:50
我也遇到了这个问题……我使用缺陷型培养基摇培得到酵母，然后提的质粒。但热激转化大肠杆菌DH5α（42° 90s），完全没有长出菌斑……很是忧伤……我怀疑是质粒提取浓度太低，杂质太多。请问楼主是如何进行酵母质粒 ...

你好我想问你一下，您最好转出来了吗？你的条件是怎样的？我用选择培养基培养酵母，试剂盒提了酵母质粒，PCR检测可以扩增出来，转到大肠杆菌里面平板上没有长出来。

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10楼2013-08-08 08:50:20