应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 质粒导入大肠杆菌
101/1返回列表
查看: 3496  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看

liuwei78

铜虫 (小有名气)

[求助] 质粒导入大肠杆菌

请问大家，较大的质粒导入到大肠杆菌感受态细胞里会不会使它的生长速率降低或是菌落形态变化？我最近将一个连接后六千多bp的质粒导入到大肠杆菌感受态细胞里，长出来的菌很小，而且挑单菌落要摇瓶18小时以上才有浑浊，请大家帮忙解释下。
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

【分子生物】EPI帖

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-05-12 18:35:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): 有点晕 2011-05-12 19:02:38
liuwei78(金币+2): 2011-05-13 08:39:36
才6KB那么小，我的科斯质粒60KB，导入之后一样长得很快，宿主是DH5a、BL21、JM109，我怀疑是培养温度不够37度导致长得慢，是不是放错放到28度去了。
赞一下(1人) 回复此楼
流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
2楼2011-05-12 18:44:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuxia82012

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): 鼓励交流 2011-05-12 19:03:05
liuwei78(金币+2): 2011-05-13 08:39:45
你这个质粒做啥用的？表达蛋白的？如果是表达蛋白的有可能产生的蛋白对菌体本身有毒害作用导致菌体生长得不好
赞一下(1人) 回复此楼
在等待中涅槃重生
3楼2011-05-12 18:47:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liuwei78

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by yuxia82012 at 2011-05-12 18:47:50:
你这个质粒做啥用的？表达蛋白的？如果是表达蛋白的有可能产生的蛋白对菌体本身有毒害作用导致菌体生长得不好

质粒是pMD19-T，上面连了几个片段，所以总共的长度有6kb多。
赞一下 回复此楼
4楼2011-05-12 19:06:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lly198784

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
amisking(金币+2): 鼓励应助 2011-05-12 20:08:48
liuwei78(金币+2): 2011-05-13 08:39:55
我觉得你的片段不算长啊，你是用的什么转化法啊？一般CaCl2 法不会使菌体形态发生变化的，如果是电转法会发生微小的形态变化，是不是你表达的问题啊。还有你用的什么培养基啊？
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2011-05-12 20:05:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuxia82012

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

liuwei78(金币+2): 2011-05-13 08:40:13
这个应该不会影响的吧，不过有的时候就是比较怪，你只要拿到那个克隆就好了
赞一下 回复此楼
在等待中涅槃重生
6楼2011-05-12 20:53:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

西瓜

荣誉版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
liuwei78(金币+2): 2011-05-13 08:40:20
dhd997(金币+5, EPI+1): good 2011-05-13 09:12:11
引用回帖:
Originally posted by liuwei78 at 2011-05-12 18:35:41:
请问大家，较大的质粒导入到大肠杆菌感受态细胞里会不会使它的生长速率降低或是菌落形态变化？我最近将一个连接后六千多bp的质粒导入到大肠杆菌感受态细胞里，长出来的菌很小，而且挑单菌落要摇瓶18小时以上才有浑 ...

你的重组子鉴定过没有？有可能质粒没转进去，摇出来的是不带质粒的杂菌哦。
我有次摇两管一样的菌（不同的菌落），12小时左右，A管长起来，B管还是澄清的。继续摇到16个小时，两管都长起来了。结果一提质粒，A管提得很亮，B管什么都没有。估计是摇16个小时太久了，抗生素失效，不带质粒的菌就长起来了。一般摇菌时要用到抗生素的话，时间最好在14小时以内。
赞一下(2人) 回复此楼
7楼2011-05-12 20:55:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

如来神掌

捐助贵宾 (著名写手)

【答案】应助回帖

偶而也会有影响的 比如菌落形体啊变小 不过不是很明显
赞一下 回复此楼
生活就像直播,没有彩排的机会,不可能从新来过!所以必须把握好现在的每一个瞬间!
8楼2011-05-13 10:56:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yanying198

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

质粒6K不算大,转的时候应该比较好转，长势不好可能是菌本身不是很好吧
赞一下 回复此楼
9楼2011-05-13 19:41:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dasheng1980

铁杆木虫 (知名作家)

大圣
同意9楼的说法
回复此楼
dasheng1980
10楼2011-12-31 15:14:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 liuwei78 的主题更新
101/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 本人考085602 化学工程 专硕 +18 不知道叫什么！ 2026-03-15 20/1000 2026-03-20 13:52 by danney002
[考研] 307求调剂 +9 冷笙123 2026-03-17 9/450 2026-03-19 22:44 by 学员8dgXkO
[考研] 生物学调剂招人！！！ +3 山海天岚 2026-03-17 4/200 2026-03-19 21:34 by 怎么释怀
[考研] 梁成伟老师课题组欢迎你的加入 +9 一鸭鸭哟 2026-03-14 11/550 2026-03-19 17:22 by ！本暗一次！
[考研] 一志愿天津大学化学工艺专业（081702）315分求调剂 +11 yangfz 2026-03-17 11/550 2026-03-19 15:06 by houyaoxu
[考研] 304求调剂 +6 司空. 2026-03-18 6/300 2026-03-18 23:03 by 星空星月
[考研] 材料工程专硕调剂 +5 204818@lcx 2026-03-17 6/300 2026-03-18 22:55 by 204818@lcx
[考研] 295求调剂 +3 一志愿京区211 2026-03-18 5/250 2026-03-18 17:03 by zhaoqian0518
[考研] 0854可跨调剂，一作一项核心论文五项专利，省、国级证书40+数一英一287 +8 小李0854 2026-03-16 8/400 2026-03-18 14:35 by 搏击518
[考研] 材料专硕306英一数二 +10 z1z2z3879 2026-03-16 13/650 2026-03-18 14:20 by 007_lilei
[考研] 312求调剂 +8 陌宸希 2026-03-16 9/450 2026-03-18 12:39 by Linda Hu
[考研] 304求调剂 +12 小熊joy 2026-03-14 13/650 2026-03-18 12:34 by Linda Hu
[考研] 299求调剂 +5 △小透明* 2026-03-17 5/250 2026-03-18 11:49 by 尽舜尧1
[考研] 293求调剂 +11 zjl的号 2026-03-16 16/800 2026-03-18 08:10 by zhukairuo
[考研] 277调剂 +5 自由煎饼果子 2026-03-16 6/300 2026-03-17 19:26 by 李leezz
[考研] 332求调剂 +6 Zz版 2026-03-13 6/300 2026-03-17 17:03 by ruiyingmiao
[考研] 一志愿苏州大学材料工程（085601）专硕有科研经历三项国奖两个实用型专利一项省级立项 +6 大火山小火山 2026-03-16 8/400 2026-03-17 15:05 by 无懈可击111
[考研] [导师推荐]西南科技大学国防/材料导师推荐 +3 尖角小荷 2026-03-16 6/300 2026-03-16 23:21 by 尖角小荷
[考研] 304求调剂 +5 素年祭语 2026-03-15 5/250 2026-03-16 17:00 by 我的船我的海
[考研] 求老师收留调剂 +4 jiang姜66 2026-03-14 5/250 2026-03-15 20:11 by Winj1e
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭