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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 质粒导入大肠杆菌
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liuwei78

铜虫 (小有名气)

[求助] 质粒导入大肠杆菌

请问大家，较大的质粒导入到大肠杆菌感受态细胞里会不会使它的生长速率降低或是菌落形态变化？我最近将一个连接后六千多bp的质粒导入到大肠杆菌感受态细胞里，长出来的菌很小，而且挑单菌落要摇瓶18小时以上才有浑浊，请大家帮忙解释下。
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1楼2011-05-12 18:35:41
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): 有点晕 2011-05-12 19:02:38
liuwei78(金币+2): 2011-05-13 08:39:36
才6KB那么小，我的科斯质粒60KB，导入之后一样长得很快，宿主是DH5a、BL21、JM109，我怀疑是培养温度不够37度导致长得慢，是不是放错放到28度去了。
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
2楼2011-05-12 18:44:28
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yuxia82012

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): 鼓励交流 2011-05-12 19:03:05
liuwei78(金币+2): 2011-05-13 08:39:45
你这个质粒做啥用的？表达蛋白的？如果是表达蛋白的有可能产生的蛋白对菌体本身有毒害作用导致菌体生长得不好
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在等待中涅槃重生
3楼2011-05-12 18:47:50
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liuwei78

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by yuxia82012 at 2011-05-12 18:47:50:
你这个质粒做啥用的？表达蛋白的？如果是表达蛋白的有可能产生的蛋白对菌体本身有毒害作用导致菌体生长得不好

质粒是pMD19-T，上面连了几个片段，所以总共的长度有6kb多。
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4楼2011-05-12 19:06:51
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lly198784

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
amisking(金币+2): 鼓励应助 2011-05-12 20:08:48
liuwei78(金币+2): 2011-05-13 08:39:55
我觉得你的片段不算长啊，你是用的什么转化法啊？一般CaCl2 法不会使菌体形态发生变化的，如果是电转法会发生微小的形态变化，是不是你表达的问题啊。还有你用的什么培养基啊？
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5楼2011-05-12 20:05:04
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yuxia82012

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

liuwei78(金币+2): 2011-05-13 08:40:13
这个应该不会影响的吧，不过有的时候就是比较怪，你只要拿到那个克隆就好了
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在等待中涅槃重生
6楼2011-05-12 20:53:35
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
liuwei78(金币+2): 2011-05-13 08:40:20
dhd997(金币+5, EPI+1): good 2011-05-13 09:12:11
引用回帖:
Originally posted by liuwei78 at 2011-05-12 18:35:41:
请问大家，较大的质粒导入到大肠杆菌感受态细胞里会不会使它的生长速率降低或是菌落形态变化？我最近将一个连接后六千多bp的质粒导入到大肠杆菌感受态细胞里，长出来的菌很小，而且挑单菌落要摇瓶18小时以上才有浑 ...

你的重组子鉴定过没有？有可能质粒没转进去，摇出来的是不带质粒的杂菌哦。
我有次摇两管一样的菌（不同的菌落），12小时左右，A管长起来，B管还是澄清的。继续摇到16个小时，两管都长起来了。结果一提质粒，A管提得很亮，B管什么都没有。估计是摇16个小时太久了，抗生素失效，不带质粒的菌就长起来了。一般摇菌时要用到抗生素的话，时间最好在14小时以内。
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7楼2011-05-12 20:55:30
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如来神掌

捐助贵宾 (著名写手)

【答案】应助回帖

偶而也会有影响的 比如菌落形体啊变小 不过不是很明显
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生活就像直播,没有彩排的机会,不可能从新来过!所以必须把握好现在的每一个瞬间!
8楼2011-05-13 10:56:40
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yanying198

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

质粒6K不算大,转的时候应该比较好转，长势不好可能是菌本身不是很好吧
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9楼2011-05-13 19:41:31
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dasheng1980

铁杆木虫 (知名作家)

大圣
同意9楼的说法
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dasheng1980
10楼2011-12-31 15:14:21
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