应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】质粒转入大肠杆菌怎么都不长啊
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
121/2返回列表12下一页
查看: 2888  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

可可猫

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】质粒转入大肠杆菌怎么都不长啊 已有11人参与

最近将老师从国外带回来的质粒转入大肠杆菌然后抽提，该质粒是Amp抗性的，热转后铺到平板上一个克隆都没有。

我用的是200微升的感受态里面加五微升质粒，质粒浓度是140ng/微升

所用的培养基的Amp浓度是100ng/ml

感觉应该是没转进去，不知道问题到底出在什么地方

请各位有经验的师兄师姐帮我看看哈
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-08-29 09:51:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

linysm

银虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+1):谢谢交流 2010-08-29 12:49:14
质粒可能不行了，要不就是感受态效价太低，建议做效价高一点的感受态；要不就把目的条带切下来，自己重新克隆。
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2010-08-29 10:40:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

夜龙舞

金虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+1):谢谢交流 2010-08-29 12:49:34
化学转化效率比较低，不行得话你就试一下电转化。
赞一下(2人) 回复此楼
3楼2010-08-29 11:01:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

周_yan

木虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+2):谢谢交流 2010-08-29 12:49:41
我认为有以下几个原因：
一、质粒时间久了，不行了。
二、感受态不行了，
三、Amp失效了，
四、转化时操作不规范。
建议弄点超感，重新配板，操作时注意一下。如果这些都没问题，仍不长，就重新弄质粒吧。
赞一下(2人) 回复此楼
4楼2010-08-29 11:08:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

louli

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
质粒浓度如何啊，如果浓度高的话，你的感受态会胀破。你试试2微升转入500微升的 感受态中
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2010-08-30 08:47:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yangjunzju

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
顺便问下楼主测定质粒的浓度用得是什么方法？
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2010-08-30 10:25:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

273914823

木虫 (小有名气)

木虫
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
是不是质粒浓度太大，我们才用2ul, 还有转化的时候温度的控制是很严格的
赞一下(1人) 回复此楼
努力做得最好
7楼2010-08-30 10:39:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

可可猫

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by yangjunzju at 2010-08-30 10:25:20:
顺便问下楼主测定质粒的浓度用得是什么方法？

用的是微量分光光度计
可以直接测定
赞一下 回复此楼
8楼2010-08-30 11:50:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lixg

铁杆木虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
silicare(金币+2):谢谢交流 2010-08-30 18:53:53
有的质粒只在某些特定的菌内才能存活，如有ccdB基因，则不能用普通大肠杆菌（DH5a,Top10）,必须用T'或DB3.1才行。问问你的老师，该质粒对菌株有何要求。
赞一下(3人) 回复此楼
9楼2010-08-30 11:58:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

smallcat227

木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by 周_yan at 2010-08-29 11:08:07:
我认为有以下几个原因：
一、质粒时间久了，不行了。
二、感受态不行了，
三、Amp失效了，
四、转化时操作不规范。
建议弄点超感，重新配板，操作时注意一下。如果这些都没问题，仍不长，就重新弄质粒吧。

Amp失效应该满平板全是菌才对……
赞一下 回复此楼
10楼2010-09-01 23:07:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 可可猫 的主题更新
121/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 315求调剂 +5 ＆123456789 2026-04-05 5/250 2026-04-05 19:55 by nepu_uu
[考研] 调剂 +3 好好读书。 2026-04-02 3/150 2026-04-05 13:02 by arrow8852
[考研] 295求调剂 +10 xndjjj 2026-04-04 10/500 2026-04-05 11:19 by 猪会飞
[考研] 283分求调剂 +9 试试看呗 2026-04-04 9/450 2026-04-05 10:27 by 果冻大王
[考研] 求调剂 +3 小沢 2026-04-03 3/150 2026-04-05 09:10 by sihailian3
[考研] 材料与化工306分找调剂 +12 沧海轻舟e 2026-04-03 13/650 2026-04-04 23:45 by lqwchd
[考研] 286求调剂 +3 草木不言 2026-04-04 3/150 2026-04-04 22:40 by lbsjt
[考研] 调剂 +4 是可乐不是可乐 2026-04-04 4/200 2026-04-04 19:41 by 唐沐儿
[考研] 085602 找调剂 +4 逆时针快乐 2026-04-02 4/200 2026-04-04 19:32 by 蓝云思雨
[考研] 309求调剂 +4 快乐的小白鸽 2026-04-04 5/250 2026-04-04 15:55 by cql1109
[考研] 266分，求材料相关专业调剂 +13 哇呼哼呼哼 2026-03-30 15/750 2026-04-03 15:24 by arrow8852
[考研] 一志愿华东理工大学，080500学硕，317分，求调剂 +13 s1145 2026-03-31 15/750 2026-04-03 11:44 by msi123
[考研] 考研调剂 +3 李木子0120 2026-04-02 5/250 2026-04-02 21:45 by dongzh2009
[考研] 一志愿上海海洋大学083200食品学硕，求调剂，接受其他专业 +6 what张 2026-04-01 7/350 2026-04-02 16:48 by zzsw+
[考研] 08开头看过来！！！ +4 wwwwffffff 2026-03-31 6/300 2026-04-02 11:42 by 均值回归
[考研] 085410 一志愿211 22408分数359求调剂 +3 123456789qw 2026-03-31 4/200 2026-04-02 00:06 by 义文wang
[考研] 一志愿西安交大材料学硕（英一数二）347，求调剂到高分子/材料相关专业 +7 zju51 2026-03-31 9/450 2026-04-01 19:35 by CFQZAFU
[考研] 349求调剂 +6 吃的不少 2026-04-01 6/300 2026-04-01 17:55 by JYD2011
[考研] 326求调剂 +4 崽崽仔 2026-03-31 4/200 2026-04-01 09:58 by 我的船我的海
[考研] 一志愿大连理工大学材料求调剂 +6 Gymno 2026-03-30 6/300 2026-03-31 07:26 by 无际的草原
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭