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zhang8826857

铁杆木虫 (著名写手)

[求助] 如何把质粒转入大肠杆菌中？

我想把一个质粒转入大肠杆菌中，是直接把大肠杆菌制成感受态细胞，然后把质粒和感受态细胞混合就可以了吗？
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好孩子！
1楼 2012-02-20 17:45:29
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

blackbee

禁虫 (正式写手)
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木(金币+2): 很详细了 2012-02-21 08:33:03
zhang8826857(金币+7): ★有帮助 2012-02-21 09:24:55
本帖内容被屏蔽
5楼2012-02-21 08:13:53
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zoeye

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
zhang8826857(金币+4): ★有帮助 2012-02-21 09:25:01
小丹木木(金币+2): 鼓励应助 2012-02-21 10:06:57
恩 就是转感受态 不过你感受态要做的好才行哈
如果感受态做的好100ng足以

1、将DNA加入50微升感受态
2、轻轻混匀 冰上放置30min
3、42°热击90S TIMER控制时间
4、加入1ml LB（超净台中操作） 37°摇1hour（不要摇太长时间，没加抗生素）
5、3000转离心 弃掉部分上清 剩下混匀涂板 37°培养
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6楼2012-02-21 09:20:12
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普通回帖

imyting

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
小丹木木(金币+2): 鼓励应助 2012-02-20 17:58:58
zhang8826857(金币+5): ★有帮助 2012-02-21 09:23:47
一种是自己购买BL21感受态细胞然后按照说明书进行转化，另一种是自己培养BL21空菌，制成感受态细胞，再进行转化。当然了，感受态细胞不止有BL21还有DH5a等，可根据实际情况选用。一般来说，表达的话还是BL21比较好，保存菌种用BL21。转化的方法也不限于上述的Cacl2转化法，还有电转等，但是如果转大肠杆菌的话，Cacl2转化就足够了。
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悠哉游哉做实验，成兮败兮我随便
2楼2012-02-20 17:54:48
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_illusion

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

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zhang8826857(金币+3): ★有帮助 2012-02-21 09:24:05
如果有了现成的感受态细胞，可以电转，电转效率比较高...或者KCM 转化...这个浓度较低，效率较低...把两者混合在一起是不可以的....
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3楼2012-02-20 19:42:30
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
zhang8826857(金币+1): ★有帮助 哪本分子克隆书呀？ 2012-02-21 09:24:37
分子克隆书上都有的。
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4楼2012-02-21 07:55:40
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july975

铜虫 (正式写手)
以前读书时就用的Cacl2法，比较简单~~~
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7楼2012-02-21 09:51:55
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我爱沈泉

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
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小丹木木(金币+1): 鼓励应助 2012-02-21 17:11:08
zhang8826857: 金币+3, ★有帮助 2012-03-29 23:11:39
买现成的感受态细胞 然后直接转化 混合后冰浴30min  42°45s  再冰浴 3min 37°摇菌 一小时 涂板 长  ok
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8楼2012-02-21 10:12:19
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yanlinsu

金虫 (小有名气)
学习了
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Godsfavorhardworker!
9楼2012-03-29 15:48:37
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hch123

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
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西瓜: 金币+1, 鼓励交流~有钱人啊~一般实验，自己做的效率就够高啦 2012-03-29 17:45:44
zhang8826857: 金币+5, ★有帮助 2012-03-29 23:11:46
我觉得还是买比较好  比较放心  （刚好上星期才做过）
1.在感受态细胞刚解冻时加入载体  一般50：2就好   轻弹混匀，冰浴30min
2.   42°热激45s  立即置于冰上2min  （注意：不要摇动离心管）
3.向每个离心管中加入500ul  LB培养基 混匀  37°  200r  培养1小时
4.普通离心机5000r  3min  沉淀即是
5.涂板是最好先倒掉一半上清再吹打均匀  然后涂
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脚踏实地：遇一个，学一个，会一个。。。
10楼2012-03-29 16:57:56
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