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zhang8826857

铁杆木虫 (著名写手)

[求助] 如何把质粒转入大肠杆菌中?

我想把一个质粒转入大肠杆菌中,是直接把大肠杆菌制成感受态细胞,然后把质粒和感受态细胞混合就可以了吗?
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好孩子!
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hch123

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
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西瓜: 金币+1, 鼓励交流~有钱人啊~一般实验,自己做的效率就够高啦 2012-03-29 17:45:44
zhang8826857: 金币+5, 有帮助 2012-03-29 23:11:46
我觉得还是买比较好  比较放心  (刚好上星期才做过)
1.在感受态细胞刚解冻时加入载体  一般50:2就好   轻弹混匀,冰浴30min
2.   42°热激45s  立即置于冰上2min  (注意:不要摇动离心管)
3.向每个离心管中加入500ul  LB培养基 混匀  37°  200r  培养1小时
4.普通离心机5000r  3min  沉淀即是
5.涂板是最好先倒掉一半上清再吹打均匀  然后涂
脚踏实地:遇一个,学一个,会一个。。。
10楼2012-03-29 16:57:56
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imyting

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
小丹木木(金币+2): 鼓励应助 2012-02-20 17:58:58
zhang8826857(金币+5): 有帮助 2012-02-21 09:23:47
一种是自己购买BL21感受态细胞然后按照说明书进行转化,另一种是自己培养BL21空菌,制成感受态细胞,再进行转化。当然了,感受态细胞不止有BL21还有DH5a等,可根据实际情况选用。一般来说,表达的话还是BL21比较好,保存菌种用BL21。转化的方法也不限于上述的Cacl2转化法,还有电转等,但是如果转大肠杆菌的话,Cacl2转化就足够了。
悠哉游哉做实验,成兮败兮我随便
2楼2012-02-20 17:54:48
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_illusion

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
zhang8826857(金币+3): 有帮助 2012-02-21 09:24:05
如果有了现成的感受态细胞,可以电转,电转效率比较高...或者KCM 转化...这个浓度较低,效率较低...把两者混合在一起是不可以的....
3楼2012-02-20 19:42:30
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
zhang8826857(金币+1): 有帮助 哪本分子克隆书呀? 2012-02-21 09:24:37
分子克隆书上都有的。
4楼2012-02-21 07:55:40
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