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zhang8826857

铁杆木虫 (著名写手)

[求助] 如何把质粒转入大肠杆菌中?

我想把一个质粒转入大肠杆菌中,是直接把大肠杆菌制成感受态细胞,然后把质粒和感受态细胞混合就可以了吗?
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好孩子!
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我爱沈泉

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木(金币+1): 鼓励应助 2012-02-21 17:11:08
zhang8826857: 金币+3, 有帮助 2012-03-29 23:11:39
买现成的感受态细胞 然后直接转化 混合后冰浴30min  42°45s  再冰浴 3min 37°摇菌 一小时 涂板 长  ok
8楼2012-02-21 10:12:19
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imyting

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
小丹木木(金币+2): 鼓励应助 2012-02-20 17:58:58
zhang8826857(金币+5): 有帮助 2012-02-21 09:23:47
一种是自己购买BL21感受态细胞然后按照说明书进行转化,另一种是自己培养BL21空菌,制成感受态细胞,再进行转化。当然了,感受态细胞不止有BL21还有DH5a等,可根据实际情况选用。一般来说,表达的话还是BL21比较好,保存菌种用BL21。转化的方法也不限于上述的Cacl2转化法,还有电转等,但是如果转大肠杆菌的话,Cacl2转化就足够了。
悠哉游哉做实验,成兮败兮我随便
2楼2012-02-20 17:54:48
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_illusion

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
zhang8826857(金币+3): 有帮助 2012-02-21 09:24:05
如果有了现成的感受态细胞,可以电转,电转效率比较高...或者KCM 转化...这个浓度较低,效率较低...把两者混合在一起是不可以的....
3楼2012-02-20 19:42:30
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
zhang8826857(金币+1): 有帮助 哪本分子克隆书呀? 2012-02-21 09:24:37
分子克隆书上都有的。
4楼2012-02-21 07:55:40
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