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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 动植物 » 综合其他 » 【求助/交流】请教一个农杆菌转导的问题
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tjutacit

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】请教一个农杆菌转导的问题已有3人参与

如果用农杆菌将一个目的基因导入植株，目的基因在我构建的质粒上，那么就需要先把这个质粒导入农杆菌中，但是农杆菌中本身不就有Ti质粒吗？怎么把Ti质粒拿出来然后放进我的质粒呢？
谢谢
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1楼2010-05-21 19:59:39
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虫子火箭兵

金虫 (正式写手)
要先将带有目的基因的双元载体（含有T-DNA插入区，目的基因应当连接到RB和LB之间）在大肠杆菌细胞中进行增殖，然后从E.coli细胞中提取质粒，使用电转化或者冻融法法将质粒转入农杆菌中，直接将带有目的基因质粒的农杆菌侵染植物，农杆菌上的T-DNA区也就是RB和LB之间的区域会插入到植物的染色体上。
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2楼2010-05-21 21:09:58
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tjutacit

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 虫子火箭兵 at 2010-05-21 21:09:58:
要先将带有目的基因的双元载体（含有T-DNA插入区，目的基因应当连接到RB和LB之间）在大肠杆菌细胞中进行增殖，然后从E.coli细胞中提取质粒，使用电转化或者冻融法法将质粒转入农杆菌中，直接将带有目的基因质粒的 ...

那请问 转入农杆菌之前其自身带的质粒怎么办呢？
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3楼2010-05-21 21:14:04
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虫子火箭兵

金虫 (正式写手)
tjutacit(金币+3):谢谢！ 2010-05-21 21:40:44
由自然环境分离的细菌细胞中含有一至三种质粒是常见的，有时多至七、八种也不令人意外。质粒的种类虽多，但并非所有的质粒都能同时在同一个宿主细胞中生存。有一些质粒在同一个宿主细胞中会发生相互排斥的现象，我们称这种现象为质粒的不共容性(incompatibility)。如果你转入的质粒和农杆菌中的质粒有不共容性，那就换一下其他类型的农杆菌感受态细胞。
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4楼2010-05-21 21:20:13
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yx_sun70

金虫 (正式写手)
野生型农杆菌中有TI质粒，现在我们用的工程菌中一般都是双元表达载体系统，工程菌中存在的质粒只带有Vir区，而没有T-DNA区，你自己构建的载体上有T-DNA区域。这样在农杆菌中两个质粒一起，Vir区上基因的表达，刺激和协助T-DNA整合到植物基因组中。
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5楼2010-05-29 16:48:07
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