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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 材料区 » 生物材料 » 高分子生物材料 » 请教各位一个关于EDC/NHS偶联的问题
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xd19881206

新虫 (小有名气)

[求助] 请教各位一个关于EDC/NHS偶联的问题 已有1人参与

我现在正在做颗粒表面带有羧基的微球偶联蛋白的实验，我想请教大家一个问题，羧基使用EDC/NHS来活化是在酸性环境中反应的，而偶联反应是在弱碱性条件下进行的，是不是要分两步进行呢？
还有个问题，能得到NHS-ester活性酯中间体吗？另外怎么检测这种结构呢？谢谢！
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NHS-EDC使用简介 纳米粒子EDC蛋白偶联 医学用书 羧基活化EDC,NHS

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1楼 2012-03-05 16:13:24
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kaokao519

禁虫 (小有名气)
★
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mwyuer(金币+1): 感谢新虫回帖交流 2012-03-06 21:13:10
本帖内容被屏蔽
5楼2012-03-06 12:10:04
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普通回帖

bioalchem

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
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mwyuer(金币+1): 感谢回帖交流 2012-03-06 08:46:48
个人以为2步更好，因为蛋白本身既有羧基也有氨基；关于PH问题，不一定酸性，至少PH=7.4的缓冲液中可以反应，只要检验结果符合预定目标就行。欢迎指正
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2楼2012-03-06 08:43:36
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liuanan

专家顾问 (著名写手)

【答案】应助回帖

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mwyuer(金币+1): 感谢回帖交流 2012-03-06 21:12:49
酸性环境中反应，pH=6左右，
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3楼2012-03-06 11:06:20
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晴朗的影子

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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mwyuer(金币+1): 感谢回帖交流 2012-03-06 21:13:02
分两步比较好，活化时pH5-6之间吧，可以得到NHS活化的中间体，试试红外应该就能表征
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xd19881206
4楼2012-03-06 11:45:23
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水木丁

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

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mwyuer(金币+1): 感谢回帖交流 2012-03-06 21:13:20
一般都要分两步的 活化7.4 偶联8.5  中间产物 我没有测过 应该不能，因为中间体过程 不好界定
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发现英语学习英语
6楼2012-03-06 13:05:03
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wubo_magic

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

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lixiangde(金币+1): 感谢回帖交流 2012-03-07 08:49:19
推荐一本书 《bioconjugation techniques》.可以当bible用了。
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7楼2012-03-06 20:47:54
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xd19881206

新虫 (小有名气)
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引用回帖:
楼: Originally posted by 晴朗的影子 at 2012-03-06 11:45:23:
分两步比较好，活化时pH5-6之间吧，可以得到NHS活化的中间体，试试红外应该就能表征

表面检测NHS-ester结构是用ATR红外检测吗？ATR红外貌似检测薄膜表面比较好。对于球的表面反应不知道怎么检测呢？
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8楼2012-03-06 20:55:49
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xd19881206

新虫 (小有名气)
引用回帖:
楼: Originally posted by kaokao519 at 2012-03-06 12:10:04:
可以通过两步，第一步加入MES缓冲液，将PH调为5-6，当第二步反应时加入磷酸盐缓冲液，PH调为7.2-7.5

我也是这么想的，试一试。主要想得到中间体的结构。
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9楼2012-03-06 20:57:11
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xd19881206

新虫 (小有名气)
引用回帖:
楼: Originally posted by 水木丁 at 2012-03-06 13:05:03:
一般都要分两步的 活化7.4 偶联8.5  中间产物 我没有测过 应该不能，因为中间体过程 不好界定

看的资料显示NHS-ester还算比较稳定的。不知道是不是这样
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10楼2012-03-06 20:58:29
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