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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 材料区 » 生物材料 » 高分子生物材料 » 请教各位一个关于EDC/NHS偶联的问题
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xd19881206

新虫 (小有名气)

[求助] 请教各位一个关于EDC/NHS偶联的问题 已有1人参与

我现在正在做颗粒表面带有羧基的微球偶联蛋白的实验，我想请教大家一个问题，羧基使用EDC/NHS来活化是在酸性环境中反应的，而偶联反应是在弱碱性条件下进行的，是不是要分两步进行呢？
还有个问题，能得到NHS-ester活性酯中间体吗？另外怎么检测这种结构呢？谢谢！
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NHS-EDC使用简介 纳米粒子EDC蛋白偶联 医学用书 羧基活化EDC,NHS

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1楼 2012-03-05 16:13:24
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xd19881206

新虫 (小有名气)
送鲜花一朵
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楼: Originally posted by 晴朗的影子 at 2012-03-06 11:45:23:
分两步比较好，活化时pH5-6之间吧，可以得到NHS活化的中间体，试试红外应该就能表征

表面检测NHS-ester结构是用ATR红外检测吗？ATR红外貌似检测薄膜表面比较好。对于球的表面反应不知道怎么检测呢？
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8楼2012-03-06 20:55:49
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xd19881206

新虫 (小有名气)
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楼: Originally posted by kaokao519 at 2012-03-06 12:10:04:
可以通过两步，第一步加入MES缓冲液，将PH调为5-6，当第二步反应时加入磷酸盐缓冲液，PH调为7.2-7.5

我也是这么想的，试一试。主要想得到中间体的结构。
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9楼2012-03-06 20:57:11
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xd19881206

新虫 (小有名气)
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楼: Originally posted by 水木丁 at 2012-03-06 13:05:03:
一般都要分两步的 活化7.4 偶联8.5  中间产物 我没有测过 应该不能，因为中间体过程 不好界定

看的资料显示NHS-ester还算比较稳定的。不知道是不是这样
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10楼2012-03-06 20:58:29
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xd19881206

新虫 (小有名气)
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楼: Originally posted by wubo_magic at 2012-03-06 20:47:54:
推荐一本书 《bioconjugation techniques》.可以当bible用了。

thanks！
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11楼2012-03-06 20:58:40
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xd19881206

新虫 (小有名气)
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楼: Originally posted by bioalchem at 2012-03-06 08:43:36:
个人以为2步更好，因为蛋白本身既有羧基也有氨基；关于PH问题，不一定酸性，至少PH=7.4的缓冲液中可以反应，只要检验结果符合预定目标就行。欢迎指正

想得到活性酯中间体的结构，不知道行不行啊。
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12楼2012-03-06 21:00:21
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xd19881206

新虫 (小有名气)
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楼: Originally posted by kaokao519 at 2012-03-06 12:10:04:
可以通过两步，第一步加入MES缓冲液，将PH调为5-6，当第二步反应时加入磷酸盐缓冲液，PH调为7.2-7.5

看文献说NHS-ester不稳定，容易水解，那在水溶液中产生的活性酯会不会也水解掉了？
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14楼2012-03-07 10:19:11
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xd19881206

新虫 (小有名气)
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楼: Originally posted by liuanan at 2012-03-07 09:39:02:
我也郑重推荐这本书，建议下载这本书当做工具书

正在学习，谢谢
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15楼2012-03-07 10:19:35
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xd19881206

新虫 (小有名气)
★
mwyuer: 金币+1, 感谢回帖交流 2012-07-03 09:49:44
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14楼: Originally posted by xd19881206 at 2012-03-07 10:19:11:
看文献说NHS-ester不稳定，容易水解，那在水溶液中产生的活性酯会不会也水解掉了？

我又想了下是不是可以这样理解：在水溶液中NHS-ester生成与水解反应存在竞争关系，当达到一定平衡后就比较稳定了，在有氨基存在的条件下，氨基与活性酯生成酰胺键结构。对不对？
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16楼2012-03-07 10:41:51
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xd19881206

新虫 (小有名气)
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20楼: Originally posted by mengzhiqin at 2012-09-11 20:39:27
现在MES溶液pH5.8中加EDC、NHS活化，再在PBS溶液pH7.4中偶联

谢谢
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21楼2012-09-14 17:55:51
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