| 查看: 1839 | 回复: 5 | |||
ssdy_5366228木虫 (小有名气)
|
[求助]
求助关于质粒提取的若干问题，谢谢了！！
|
|
求教各位师兄姐同仁，小弟提取野生型大肠杆菌（临床菌）的质粒，有若干问题： 1.野生型大肠杆菌R质粒是松弛性？还是严紧型？我查过资料，说是低拷贝严紧型，不知道正确与否。 2.用LB液体培养基培养细菌，用不用加抗生素？很多文献说加Amp，但我所提质粒携带喹诺酮类耐药基因，加Amp有作用吗？是不是应该加喹诺酮类抗生素呢？ 3.如果要加抗生素，终浓度应该是多少呢？经查资料，严紧型与松弛性质粒的工作终浓度不一样，后者明显大于前者。 有过经验的师兄姐同仁，望不吝赐教！小弟感激不尽，在此郑重谢过！！ |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 实验技术资源 |
» 猜你喜欢
5个%2F，非固定段22个字母
已经有5人回复
-
伯胺上甲基求助
已经有5人回复
-
投英文期刊如何查重
已经有3人回复
-
生命口C13面上会评时间
已经有10人回复
-
生命口面上会评结束了吗大家有知道结果吗？现在还没有结果正常不？
已经有7人回复
-
生生命学部会评
已经有4人回复
-
H口，面上，时间戳7月7日。
已经有3人回复
-
小木虫没落了，除了祈祷帖子，几乎看不到有价值的帖子
已经有14人回复
-
会评
已经有5人回复
-
E口会评
已经有13人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 酵母质粒转化及提取验证问题求助
已经有12人回复
- 【求助/交流】质粒提取线性化的很多
已经有8人回复
- 【求助/交流】质粒提取
已经有21人回复
- 【求助/交流】弱弱地问一句，质粒提取试剂盒使用前需要灭菌吗
已经有12人回复
- 【求助/交流】质粒提取的杂质去除问题
已经有14人回复
- 【求助/交流】质粒提取中的一点问题
已经有11人回复
- 【求助/交流】酵母质粒提取
已经有4人回复
- 【求助/交流】质粒提取不出来--郁闷
已经有24人回复
- 【求助/交流】转化子质粒为什么无法提取出来
已经有6人回复
【答案】应助回帖
★
ssdy_5366228(金币+20): 谢谢你！ 2011-07-23 11:57:57
qinhy(金币+1): 谢谢应助回帖~ 2011-07-24 09:26:53
ssdy_5366228(金币+20): 谢谢你！ 2011-07-23 11:57:57
qinhy(金币+1): 谢谢应助回帖~ 2011-07-24 09:26:53
|
1. 野生型大肠杆菌一般都含有很多个质粒，分子量有大有小，小的2-3kb，大的200-300kb，所以类型是不一样的，拷贝数和严谨性自然有高有低。 2.如果你的野生菌株不对任何药物耐药，你培养的时候肯定不能加任何抗生素。但如果你提的是携带氟喹诺酮耐药基因质粒的菌株，应该加入氟喹诺酮类药物，如环丙沙星等，不能加Amp。 3.加环丙沙星的话，只要加到终浓度等于该菌对环丙的耐药界限值就可以了。不要太高，否则可能会影响你菌的生长。比如大肠杆菌，加到4μg/ml就足够了。 |
2楼2011-07-23 06:18:47
ssdy_5366228
木虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 2471
- 红花: 1
- 帖子: 76
- 在线: 115.3小时
- 虫号: 883081
- 注册: 2009-10-25
- 性别: GG
- 专业: 兽医药理学与毒理学
3楼2011-07-23 12:05:52
【答案】应助回帖
ssdy_5366228(金币+10): 谢谢你 2011-07-27 01:58:57
|
同学你好，当我们在实验室提取克隆菌事需要加入氨苄，是因为我们在人工载体上面导入了目的片段后才显示其抗药性，因此，我认为加入抗生素的目的在于筛选我们的阳性菌落，不让杂菌生长，以期得到我们的目的克隆。而你的三组对照试验，既然三组都能提取出质粒，表明你的菌生长情况一样，也就是说应该对这两种抗生素都有耐药性，所以我认为你的三个组在提取质粒后不能表现出区别是正常情况。 如果你希望提取质粒比较多，条带比较亮，可以试试第一步多加一点菌液，最后一步的buffer少加一些这样来提高质粒浓度。 |
4楼2011-07-24 16:51:20
【答案】应助回帖
★
karl2100(金币+1): 谢谢发言！ 2011-07-31 01:11:08
karl2100(金币+1): 谢谢发言！ 2011-07-31 01:11:08
|
你好，野生菌株背景来源不同，有时甚至相同的情况下都可能含有许多大小不同的质粒。如果你要提野生质粒，建议最好用中提或大提的方法，这样才能把那些分子量大，而且拷贝数低的质粒提出来。我们实验室之前提的时候，一株菌含上十个质粒很正常。你所加的抗生素只可能对含有你那种抗生素耐药基因的质粒有一定的促进作用，对其他的质粒应该用处不大。所以就看你试验的目的，如果只想提含某种耐药基因的那一个质粒，就加特定抗生素培养；如果想把某株菌的所有质粒都提出来，那么不加抗生素培养也没问题，加也无妨。 |
5楼2011-07-27 04:03:00
ssdy_5366228
木虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 2471
- 红花: 1
- 帖子: 76
- 在线: 115.3小时
- 虫号: 883081
- 注册: 2009-10-25
- 性别: GG
- 专业: 兽医药理学与毒理学
6楼2011-07-31 00:21:53
100