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广州莱客

[交流] 【求助/交流】质粒提取不出来--郁闷 已有14人参与

新手
最近在做一个重组质粒的转化，但是kana细菌上有长出来了，可是一直提不出质粒来，郁闷死了。
有的板不长菌落，是不是可以说明kana和板没有污染呢？
老板说有可能是我的连接没有做好，大家有没有什么建议呢
谢谢
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1楼 2010-05-28 17:09:00
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Temin2009

木虫 (正式写手)
★ ★
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1949stone(金币+1):谢谢交流 2010-05-28 19:31:27
可以做个菌落PCR鉴定一下，如果能P出目的条带，那就说明你的提质粒试剂盒不好用。如果P不出来，那说明菌里面没有转进质粒，需要重新做转化。
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2楼2010-05-28 17:16:28
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lixg

铁杆木虫 (正式写手)
★
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非常同意楼上的建议。一般来说不会提不出质粒，最多也就是产量低，所以估计应该是连接或转化的问题。
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3楼2010-05-28 17:27:20
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
★ ★
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1949stone(金币+1):谢谢交流 2010-05-28 19:31:38
没有质粒，菌是没有抗性的，怎么可能能生长呢，怀疑是质粒转化率太低，不长更说明是这个问题，应该首先检查感受态
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4楼2010-05-28 19:10:37
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idealhy

金虫 (小有名气)
★
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建议提高你的kan抗性。因为不含质粒的大肠时间久了也有可能在低浓度的kan里面生长的。
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5楼2010-05-28 19:41:45
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liu_jiajia

金虫 (正式写手)
估计是连接出问题了吧
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6楼2010-05-28 19:42:51
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桂花啊

铁虫 (初入文坛)
★
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三种溶液的处理怎么样啊？
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7楼2010-05-28 19:50:41
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ququr008

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
菌液碱裂解液直接点样电泳，如果有质粒可以电泳看到。
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8楼2010-05-28 20:31:17
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yinsongna

金虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
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scelab(金币+3):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-05-28 22:51:34
1.检查你的菌体抗性，确定kana抗性没有错
2.检验感受态
3.连接的时候做CIAP处理，去除自连情况
4.重做转化（可以找人帮你看下）
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9楼2010-05-28 20:40:14
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广州莱客

引用回帖:
Originally posted by yinsongna at 2010-05-28 20:40:14:
1.检查你的菌体抗性，确定kana抗性没有错
2.检验感受态
3.连接的时候做CIAP处理，去除自连情况
4.重做转化（可以找人帮你看下）

谢谢大家的建议
1 我的菌落是抗kana 的
2 感受态转入过其他的质粒，可以长出来也能提取出来，说么OK
3 没有做过，哈 不知道怎么做
4 也重做过好多次
还有 有时候会出现杂的条带 但是都不是我想要的
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10楼2010-05-28 20:48:59
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