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广州莱客

[交流] 【求助/交流】质粒提取不出来--郁闷 已有14人参与

新手
最近在做一个重组质粒的转化,但是kana细菌上有长出来了,可是一直提不出质粒来,郁闷死了。
有的板不长菌落,是不是可以说明kana和板没有污染呢?
老板说有可能是我的连接没有做好,大家有没有什么建议呢
谢谢
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Temin2009

木虫 (正式写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1949stone(金币+1):谢谢交流 2010-05-28 19:31:27
可以做个菌落PCR鉴定一下,如果能P出目的条带,那就说明你的提质粒试剂盒不好用。如果P不出来,那说明菌里面没有转进质粒,需要重新做转化。
2楼2010-05-28 17:16:28
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lixg

铁杆木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
非常同意楼上的建议。一般来说不会提不出质粒,最多也就是产量低,所以估计应该是连接或转化的问题。
3楼2010-05-28 17:27:20
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yujiaping1

木虫 (著名写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1949stone(金币+1):谢谢交流 2010-05-28 19:31:38
没有质粒,菌是没有抗性的,怎么可能能生长呢,怀疑是质粒转化率太低,不长更说明是这个问题,应该首先检查感受态
4楼2010-05-28 19:10:37
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idealhy

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
建议提高你的kan抗性。因为不含质粒的大肠时间久了也有可能在低浓度的kan里面生长的。
5楼2010-05-28 19:41:45
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liu_jiajia

金虫 (正式写手)

估计是连接出问题了吧
6楼2010-05-28 19:42:51
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桂花啊

铁虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
三种溶液的处理怎么样啊?
7楼2010-05-28 19:50:41
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ququr008

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
菌液碱裂解液直接点样电泳,如果有质粒可以电泳看到。
8楼2010-05-28 20:31:17
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yinsongna

金虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
scelab(金币+3):欢迎多来交流!:tiger06: 2010-05-28 22:51:34
1.检查你的菌体抗性,确定kana抗性没有错
2.检验感受态
3.连接的时候做CIAP处理,去除自连情况
4.重做转化(可以找人帮你看下)
9楼2010-05-28 20:40:14
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广州莱客

引用回帖:
Originally posted by yinsongna at 2010-05-28 20:40:14:
1.检查你的菌体抗性,确定kana抗性没有错
2.检验感受态
3.连接的时候做CIAP处理,去除自连情况
4.重做转化(可以找人帮你看下)

谢谢大家的建议
1 我的菌落是抗kana 的
2 感受态转入过其他的质粒,可以长出来也能提取出来,说么OK
3 没有做过,哈 不知道怎么做
4 也重做过好多次
还有 有时候会出现杂的条带 但是都不是我想要的
10楼2010-05-28 20:48:59
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