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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】质粒提取不出来--郁闷
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广州莱客

引用回帖:
Originally posted by 桂花啊 at 2010-05-28 19:50:41:
三种溶液的处理怎么样啊？

我自己也觉得是连接处问题了
但是不知道问题在哪里
大家有没有比较有经验的连接体系呢
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11楼2010-05-28 20:51:16
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天空与飞鸟

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
做个电泳试试   有就可以直接看到
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12楼2010-05-28 23:26:39
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广州莱客

有跑电泳了
但是基本都没有 偶尔有条带的话 都是杂带
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13楼2010-05-28 23:28:43
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen
做个pcr看看有没有结果！这是最简洁的方法！
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Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
14楼2010-05-28 23:51:28
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yinsongna

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 广州莱客 at 2010-05-28 20:48:59:



谢谢大家的建议
1 我的菌落是抗kana 的
2 感受态转入过其他的质粒，可以长出来也能提取出来，说么OK
3 没有做过，哈 不知道怎么做
4 也重做过好多次
还有 有时候会出现杂的条带 但是都不是我想要的

你的重组质粒连的多大的片段
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15楼2010-05-29 09:01:51
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xing1789

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
PCR回收的效果不好吧  ，再就是你的片段是不是有毒性呢
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16楼2010-05-29 20:28:07
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广州莱客

引用回帖:
Originally posted by yinsongna at 2010-05-29 09:01:51:



你的重组质粒连的多大的片段

2KB多一点
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17楼2010-05-31 08:54:11
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广州莱客

引用回帖:
Originally posted by xing1789 at 2010-05-29 20:28:07:
PCR回收的效果不好吧  ，再就是你的片段是不是有毒性呢

PCR回收的条带还是挺亮的了
我的片段有没有毒性就不知道怎么看了
有没有什么方法呢 谢谢
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18楼2010-05-31 08:55:36
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xing1789

铜虫 (初入文坛)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+2):感谢交流~~ 2010-06-02 18:43:45
你的感受态是不是污染了呢？
在做连接的时候vector and insert 的比例 正常角度讲摩尔比应该是1：3 但随着你的vector and insert 的大小而改变。insert越小， 比例应该越大。
换句话说就是你的vector有点就够。
如果做电泳有杂带 检测一下你的vector是不是纯品。 还有就是你的酶切位点是否正确。 还有就是在做胶回收的时候是不是有污染。
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19楼2010-06-01 21:21:48
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广州莱客

引用回帖:
Originally posted by xing1789 at 2010-06-01 21:21:48:
你的感受态是不是污染了呢？
在做连接的时候vector and insert 的比例 正常角度讲摩尔比应该是1：3 但随着你的vector and insert 的大小而改变。insert越小， 比例应该越大。
换句话说就是你的vector有点就够。 ...


vector 有5KB多 insert 2KB
质粒双切后是单条带
DNA双切就看不到了--不知道有没有什么方法可以看

之前的朋友说看看是不是目的片段有毒，应该是没有的 DH5A的基本不表达蛋白
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20楼2010-06-02 12:24:30
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