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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】质粒提取不出来--郁闷
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广州莱客

[交流] 【求助/交流】质粒提取不出来--郁闷 已有14人参与

新手
最近在做一个重组质粒的转化，但是kana细菌上有长出来了，可是一直提不出质粒来，郁闷死了。
有的板不长菌落，是不是可以说明kana和板没有污染呢？
老板说有可能是我的连接没有做好，大家有没有什么建议呢
谢谢
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1楼 2010-05-28 17:09:00
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广州莱客

引用回帖:
Originally posted by xing1789 at 2010-06-01 21:21:48:
你的感受态是不是污染了呢？
在做连接的时候vector and insert 的比例 正常角度讲摩尔比应该是1：3 但随着你的vector and insert 的大小而改变。insert越小， 比例应该越大。
换句话说就是你的vector有点就够。 ...


vector 有5KB多 insert 2KB
质粒双切后是单条带
DNA双切就看不到了--不知道有没有什么方法可以看

之前的朋友说看看是不是目的片段有毒，应该是没有的 DH5A的基本不表达蛋白
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20楼2010-06-02 12:24:30
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Temin2009

木虫 (正式写手)
★ ★
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1949stone(金币+1):谢谢交流 2010-05-28 19:31:27
可以做个菌落PCR鉴定一下，如果能P出目的条带，那就说明你的提质粒试剂盒不好用。如果P不出来，那说明菌里面没有转进质粒，需要重新做转化。
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2楼2010-05-28 17:16:28
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lixg

铁杆木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
非常同意楼上的建议。一般来说不会提不出质粒，最多也就是产量低，所以估计应该是连接或转化的问题。
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3楼2010-05-28 17:27:20
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
★ ★
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1949stone(金币+1):谢谢交流 2010-05-28 19:31:38
没有质粒，菌是没有抗性的，怎么可能能生长呢，怀疑是质粒转化率太低，不长更说明是这个问题，应该首先检查感受态
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4楼2010-05-28 19:10:37
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