应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 郁闷啊，提不出质粒！
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
111/2返回列表12下一页
查看: 1829  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

b529941390

木虫 (正式写手)

[交流] 郁闷啊，提不出质粒！ 已有7人参与

用的是pTRC 6His的质粒载体，需要提取质粒测序，老是提取不出来，郁闷啊，更不爽的是，在做菌落PCR和质粒PCR的时候，阴性对照也有了条带！
做生物的东西怎么这么麻烦呢，好像去做化学啊！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
不离不弃不易不移
1楼 2011-07-07 15:32:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

holyala

木虫 (著名写手)

砖家
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
提质粒...这个~~楼主有分析过是什么原因吗？摇菌、提取、检测等等步骤都有可能出问题哦...其实提质粒还蛮简单的，至少比提RNA容易多了。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2011-07-07 16:03:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

阿修罗Axuro

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
生物和化学  自然科学里面最悲剧的两个专业~~~~~~~~
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2011-07-07 16:31:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

b529941390

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by holyala at 2011-07-07 16:03:53:
提质粒...这个~~楼主有分析过是什么原因吗？摇菌、提取、检测等等步骤都有可能出问题哦...其实提质粒还蛮简单的，至少比提RNA容易多了。

提取过程用的是kit
然后菌是从-80度跳出来的，在LB A+的培养基中的，然后20mL提取质粒，1uL电泳竟然都看不到条带！  后来试了下8uL电泳，可以看到很弱的质粒条带
赞一下 回复此楼
不离不弃不易不移
4楼2011-07-07 17:06:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yesucao

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
个人建议，如果你要用于测序的话最好是试剂盒提取质粒，手提的话毕竟有限，有的时候达不到测序要求，不过也看你送去测序公司有哪些要求，可以让他们给你发一份看看。
我们实验室都是用摇好的菌液送去测序的，EP管装着，1-2ml就行了，常温运输就可以，测序公司会再活化一下，提质粒，测序。
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2011-07-07 20:34:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yguang

木虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
提质粒是分子生物学中最简单最基本的工作，这一关过不了可不行！貌似楼主是接着别人的工作做的，你确定你用的菌里有这个质粒吗，还是先验证一下吧，不要太相信前人的工作。问问用过这个菌和质粒的师兄师姐是怎么回事。还有就是，不要被一些小挫折吓到，如果楼主仅仅是发发牢骚那就发，如果楼主表达的是真实想法，那趁早换专业去吧，因为你以后会遇到比这个麻烦无数倍的事，我做了15年分子生物学，现在实验中还经常遇到一些奇怪的事呢！
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2011-07-07 21:41:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三尺百度豆豆

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
提质粒真是很简单的，比化学好玩。8ul是有微弱条带，就说明是提出来了，继续加油……
赞一下(1人) 回复此楼
豆豆在哪里，我在找你
7楼2011-07-08 00:10:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangdandelia

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
可以选择用试剂盒提取，如果用试剂盒提取不出来，可能是你的菌有问题了。
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2011-07-08 11:03:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangdandelia

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
Originally posted by b529941390 at 2011-07-07 17:06:53:
提取过程用的是kit
然后菌是从-80度跳出来的，在LB A+的培养基中的，然后20mL提取质粒，1uL电泳竟然都看不到条带！  后来试了下8uL电泳，可以看到很弱的质粒条带

提完质粒可以测一下浓度，用 nanodrop测DNA浓度，试着多提几次就有经验了，试验需要多重复，然后熟能生巧，一切都会好起来的~~~
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2011-07-08 11:06:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

holyala

木虫 (著名写手)

砖家
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
Originally posted by b529941390 at 2011-07-07 17:06:53:
提取过程用的是kit
然后菌是从-80度跳出来的，在LB A+的培养基中的，然后20mL提取质粒，1uL电泳竟然都看不到条带！  后来试了下8uL电泳，可以看到很弱的质粒条带

1uL没有，8uL有，说明不是没有提出来，而是浓度太低。根据你的描述，我估计可能是摇菌的问题，你直接将菌种从-80挑出来就接种去摇，这个...不太好，菌不容易长起来。建议先将-80保存的菌种接到5mL LB培养基的试管中，37℃振荡培养6~8小时，再用这种活化的菌液去接种到三角瓶中培养过夜，然后再提质粒。
赞一下(1人) 回复此楼
10楼2011-07-08 11:26:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 b529941390 的主题更新
111/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿电子科技大学085600材料与化工 329分求调剂 +8 Naiko 2026-04-04 8/400 2026-04-05 08:32 by barlinike
[考研] 311分 22408 求调剂 +3 bing_bot 2026-04-03 3/150 2026-04-05 00:43 by chongya
[考研] 26考研调剂0710 0860 +9 补补不补 2026-04-03 14/700 2026-04-04 23:32 by 果冻大王
[考研] 一志愿郑州大学材料与化工085600，求调剂 +24 吃的不少 2026-04-02 24/1200 2026-04-04 23:20 by 永字号
[考研] 298求调剂 +5 zzz，，r 2026-04-02 8/400 2026-04-04 19:55 by 蓝云思雨
[考研] 359求调剂 +7 hhhhaaaa$ 2026-04-04 7/350 2026-04-04 18:49 by imissbao
[考研] 333求调剂 +9 阿科逸 2026-03-31 9/450 2026-04-04 18:25 by macy2011
[考研] 348求调剂 +4 wukira 2026-04-04 4/200 2026-04-04 18:21 by macy2011
[考研] 怎么删帖子啊 +3 缝曦1000 2026-04-04 3/150 2026-04-04 14:20 by 土木硕士招生
[考研] 085601一志愿北理325分求调剂 +6 找调剂，， 2026-04-02 6/300 2026-04-03 22:20 by 柟�?
[考研] 化工求调剂 +11 荔香芝士椰奶 2026-04-03 11/550 2026-04-03 22:06 by 啵啵啵0119
[考研] 320调剂 +4 农业工程与信息� 2026-04-03 4/200 2026-04-03 21:40 by lbsjt
[考研] 320求调剂 +5 振—TZ 2026-04-02 5/250 2026-04-03 14:42 by fxue1114
[考研] 机械专硕297 +3 Afksy 2026-04-03 3/150 2026-04-03 14:24 by 1753564080
[考研] 求调剂 +9 akdhjs 2026-03-31 11/550 2026-04-03 13:32 by akdhjs
[考研] 抱歉 +5 田洪有 2026-03-30 5/250 2026-04-03 10:24 by linyelide
[考研] 348环境工程调剂 +3 吴彦祖24k 2026-04-01 3/150 2026-04-02 09:14 by nanaliuyun
[考研] 285求调剂 +11 AZMK 2026-04-01 11/550 2026-04-01 22:40 by peike
[考研] 349求调剂 +6 吃的不少 2026-04-01 6/300 2026-04-01 17:55 by JYD2011
[考研] 一志愿西电085401数一英一299求调剂 六级521 +4 爱吃大鸭梨 2026-03-31 4/200 2026-03-31 11:51 by 搏击518
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭