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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 为什么我的测序送过去公司那边摇菌总是失败？
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wcwluwei

禁虫 (小有名气)
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1楼 2012-03-07 22:21:06
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冰凝东

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜(金币+1): 鼓励交流！ 2012-03-08 18:41:47
纯化一下，将摇好的菌液取微量重新涂板或划线挑单克隆，PCR检测……
我也有遇到过类似情况，原因可能是所挑单克隆为假阳性……
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2楼2012-03-07 22:43:57
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ivxy

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜(金币+1): 我也觉得还是提了质粒比较好 2012-03-08 18:41:32
不然你就送质粒过去测序好了
菌长得不好是不是活力比较差？
我们有时候送测序时会在菌液里加些甘油。
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3楼2012-03-08 13:30:02
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
楼主可以拿同一个样品分别到两个公司测一下，看看原因出在哪里？
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jiayoubashaonian
4楼2012-03-08 21:00:27
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panda73

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木(金币+2): 鼓励应助 2012-03-09 09:42:54
如果你构建的是原核表达载体，那很有可能是你克隆的基因对E.coli有毒性。如果你用的是lac启动子，可以考虑在培养基中加葡萄糖至终浓度3%，而且建议测序公司培养时也加葡萄糖。
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5楼2012-03-09 07:57:32
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小白虾

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我也遇到过此种情况，建议你送质粒测序或者直接送PCR产物
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飞的更高
6楼2012-03-10 10:32:31
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xingxing8713

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜(金币+1): 鼓励分享经验哈 2012-03-10 14:47:00
哈哈，我现在正遇到了这个问题，就是挑完之后送测，剩下的再次摇，就摇不出来了，感受态有问题，我们实验室的同一批感受态，到后面几个人用的时候就有问题了，他们送华大要么摇不出菌，要么提不出质粒。我自己摇也要不出来（有对照，除了菌啥都一样），菌有问题。
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7楼2012-03-10 11:06:38
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肖颖2009

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

测序公司比较垃圾吧，建议还家公司测~
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8楼2012-06-21 11:31:39
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