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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】我用菌液摇菌抽提质粒浓度很低，请大家帮忙解决下，为什么
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yananjizhu

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】我用菌液摇菌抽提质粒浓度很低，请大家帮忙解决下，为什么 已有12人参与

大家多多帮忙，我的质粒抽不出来，快愁死我了，我用转化后的菌落摇菌，摇出来的菌液不是特别的浑浊，该怎么办呀，我用抽出质粒的菌液摇菌，抽出的质粒浓度低的吓人，该怎弄，虫友们多帮忙呀
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1楼 2010-11-07 18:20:55
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

yananjizhu

新虫 (初入文坛)
我们实验室都用omega的觉得很稳定，你们用什么的交流下嘛
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10楼2010-11-28 00:28:32
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普通回帖

randomqd

木虫 (小有名气)

樱花骑士

有四。。。

★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+5):欢迎分享经验！ 2010-11-07 22:29:19
可能：
1菌液污染，长的大多数是杂菌目的菌体被稀释了，有加抗生素否？
2质粒为低拷贝质粒
3提质粒步骤不过关？让人给你看看。。。
4质粒浓度低？是跑的电泳结果还是测的结果，建议验证一下。。。
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未来天空才是极限
2楼2010-11-07 19:13:05
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fangcaiyuan

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
你提质粒用的是试剂盒还是自己配制的试剂？其实提质粒用试剂盒提还是比较不错的。转化后的菌落摇菌一般都是摇十几个小时就够了，不需要特别浑浊。
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3楼2010-11-08 09:29:34
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foryever

木虫 (文坛精英)

假装忧伤的枯木桩
转化的什么菌？
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　　　　　　　　　♨物是人非事事休，欲语泪先流♨
4楼2010-11-08 09:33:19
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路人甲007

木虫 (正式写手)

小七
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
首先看看转化的什么菌   要是表达菌的话 提的质粒确实很低
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与人玫瑰手有余香
5楼2010-11-08 14:38:36
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yananjizhu

新虫 (初入文坛)
谢谢各位，质粒是高拷贝的，加了抗生素，质粒抽提绝对过关，浓度平均50ng/ul，用的是omega的试剂盒，转化DH5a,是表达质粒，我还抽了其他的表达质粒都是正常的，大家帮我分析下
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6楼2010-11-26 22:42:45
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wmj840613

木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
个人????：第一，很???能???液是污染的带有??????。第二，???以试??????个别家的试剂盒。第三，收集???液那步多????两次。第四，洗脱时用试剂盒的te，????用??????水，???以多洗脱两次。第五，用抽???出浓度很低的质粒pcr，看到底???没有原质粒存在，没有的??，就说明???液污染并???转化???。
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每个人跑起来都是一部传奇。。。
7楼2010-11-26 23:20:46
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wmj840613

木虫 (小有名气)
怎么乱??了？？？??闷
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每个人跑起来都是一部传奇。。。
8楼2010-11-26 23:22:40
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
收到的菌体多不多？确定没有污染吧~

omega的试剂盒嘛…………我是从来不信的，教学实验用了一次，全班杯具，是用他们的胶回收
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9楼2010-11-27 09:14:05
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