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yananjizhu

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】我用菌液摇菌抽提质粒浓度很低,请大家帮忙解决下,为什么 已有12人参与

大家多多帮忙,我的质粒抽不出来,快愁死我了,我用转化后的菌落摇菌,摇出来的菌液不是特别的浑浊,该怎么办呀,我用抽出质粒的菌液摇菌,抽出的质粒浓度低的吓人,该怎弄,虫友们多帮忙呀
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yananjizhu

新虫 (初入文坛)

我们实验室都用omega的觉得很稳定,你们用什么的交流下嘛
10楼2010-11-28 00:28:32
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普通回帖

randomqd

木虫 (小有名气)

樱花骑士

有四。。。

★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
amisking(金币+5):欢迎分享经验! 2010-11-07 22:29:19
可能:
1菌液污染,长的大多数是杂菌目的菌体被稀释了,有加抗生素否?
2质粒为低拷贝质粒
3提质粒步骤不过关?让人给你看看。。。
4质粒浓度低?是跑的电泳结果还是测的结果,建议验证一下。。。
未来天空才是极限
2楼2010-11-07 19:13:05
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fangcaiyuan

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
你提质粒用的是试剂盒还是自己配制的试剂?其实提质粒用试剂盒提还是比较不错的。转化后的菌落摇菌一般都是摇十几个小时就够了,不需要特别浑浊。
3楼2010-11-08 09:29:34
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foryever

木虫 (文坛精英)

假装忧伤的枯木桩

转化的什么菌?
         ♨物是人非事事休,欲语泪先流♨
4楼2010-11-08 09:33:19
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路人甲007

木虫 (正式写手)

小七


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
首先看看转化的什么菌   要是表达菌的话 提的质粒确实很低
与人玫瑰手有余香
5楼2010-11-08 14:38:36
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yananjizhu

新虫 (初入文坛)

谢谢各位,质粒是高拷贝的,加了抗生素,质粒抽提绝对过关,浓度平均50ng/ul,用的是omega的试剂盒,转化DH5a,是表达质粒,我还抽了其他的表达质粒都是正常的,大家帮我分析下
6楼2010-11-26 22:42:45
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wmj840613

木虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
个人????:第一,很???能???液是污染的带有??????。第二,???以试??????个别家的试剂盒。第三,收集???液那步多????两次。第四,洗脱时用试剂盒的te,????用??????水,???以多洗脱两次。第五,用抽???出浓度很低的质粒pcr,看到底???没有原质粒存在,没有的??,就说明???液污染并???转化???。
每个人跑起来都是一部传奇。。。
7楼2010-11-26 23:20:46
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wmj840613

木虫 (小有名气)

怎么乱??了?????闷
每个人跑起来都是一部传奇。。。
8楼2010-11-26 23:22:40
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
收到的菌体多不多?确定没有污染吧~

omega的试剂盒嘛…………我是从来不信的,教学实验用了一次,全班杯具,是用他们的胶回收
9楼2010-11-27 09:14:05
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