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wcwluwei

禁虫 (小有名气)

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冰凝东

金虫 (小有名气)

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西瓜(金币+1): 鼓励交流! 2012-03-08 18:41:47
纯化一下,将摇好的菌液取微量重新涂板或划线挑单克隆,PCR检测……
我也有遇到过类似情况,原因可能是所挑单克隆为假阳性……
2楼2012-03-07 22:43:57
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ivxy

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


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西瓜(金币+1): 我也觉得还是提了质粒比较好 2012-03-08 18:41:32
不然你就送质粒过去测序好了
菌长得不好是不是活力比较差?
我们有时候送测序时会在菌液里加些甘油。
3楼2012-03-08 13:30:02
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

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感谢参与,应助指数 +1
楼主可以拿同一个样品分别到两个公司测一下,看看原因出在哪里?
jiayoubashaonian
4楼2012-03-08 21:00:27
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panda73

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
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小丹木木(金币+2): 鼓励应助 2012-03-09 09:42:54
如果你构建的是原核表达载体,那很有可能是你克隆的基因对E.coli有毒性。如果你用的是lac启动子,可以考虑在培养基中加葡萄糖至终浓度3%,而且建议测序公司培养时也加葡萄糖。
5楼2012-03-09 07:57:32
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小白虾

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我也遇到过此种情况,建议你送质粒测序或者直接送PCR产物
飞的更高
6楼2012-03-10 10:32:31
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xingxing8713

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


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西瓜(金币+1): 鼓励分享经验哈 2012-03-10 14:47:00
哈哈,我现在正遇到了这个问题,就是挑完之后送测,剩下的再次摇,就摇不出来了,感受态有问题,我们实验室的同一批感受态,到后面几个人用的时候就有问题了,他们送华大要么摇不出菌,要么提不出质粒。我自己摇也要不出来(有对照,除了菌啥都一样),菌有问题。
7楼2012-03-10 11:06:38
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肖颖2009

铁虫 (正式写手)

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测序公司比较垃圾吧,建议还家公司测~
8楼2012-06-21 11:31:39
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