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kittykbh

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[求助] 细菌16s pcr原液测序问题

请教各位大虾~~~我用的引物是27f和1492r，p的是细菌的16s全长，然后原液测序，双向测通后拼接。测序公司每次都能测出的我1492r，每次都是告诉我27f测不通，每次都是测到500bp左右以后断掉，我看了峰图，1492r很稳定也很好，飘峰一般都是在800bp以后了，但是就是27f总是测不通，到500bp突然就杂峰很大很多然后就断掉。
pcr的条带也是很明亮没有杂带的，能是什么原因呢？？？已经测了很多样品了，大部分的27f都测不通，急切的求指教啊~~

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1楼 2011-06-14 23:36:35

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xiadongliang

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dhd997(金币+2): 鼓励一下 2011-06-15 11:05:01

引用回帖:

Originally posted by kittykbh at 2011-06-14 23:36:35:
请教各位大虾~~~我用的引物是27f和1492r，p的是细菌的16s全长，然后原液测序，双向测通后拼接。测序公司每次都能测出的我1492r，每次都是告诉我27f测不通，每次都是测到500bp左右以后断掉，我看了峰图，1492r很稳 ...

你的27F引物合成不会有问题把。
要不你就重新合成一下27F，要不你就合成一个中间的测序引物反向接着1492R的引物继续测通，不用27F测了。