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kittykbh

铜虫 (正式写手)

[求助] 细菌16s pcr原液测序问题

请教各位大虾~~~我用的引物是27f和1492r,p的是细菌的16s全长,然后原液测序,双向测通后拼接。测序公司每次都能测出的我1492r,每次都是告诉我27f测不通,每次都是测到500bp左右以后断掉,我看了峰图,1492r很稳定也很好,飘峰一般都是在800bp以后了,但是就是27f总是测不通,到500bp突然就杂峰很大很多然后就断掉。
pcr的条带也是很明亮没有杂带的,能是什么原因呢???已经测了很多样品了,大部分的27f都测不通,急切的求指教啊~~
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redbull2011

捐助贵宾 (正式写手)

【答案】应助回帖

kittykbh(金币+2): 2011-06-17 23:33:53
换家公司测试试
不同公司技术有差别 胶也让公司回收算了 省事
4楼2011-06-16 21:55:36
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xiadongliang

金虫 (正式写手)

★ ★
dhd997(金币+2): 鼓励一下 2011-06-15 11:05:01
引用回帖:
Originally posted by kittykbh at 2011-06-14 23:36:35:
请教各位大虾~~~我用的引物是27f和1492r,p的是细菌的16s全长,然后原液测序,双向测通后拼接。测序公司每次都能测出的我1492r,每次都是告诉我27f测不通,每次都是测到500bp左右以后断掉,我看了峰图,1492r很稳 ...

你的27F引物合成不会有问题把。
要不你就重新合成一下27F,要不你就合成一个中间的测序引物反向接着1492R的引物继续测通,不用27F测了。
2楼2011-06-15 09:54:06
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kittykbh

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by xiadongliang at 2011-06-15 09:54:06:
你的27F引物合成不会有问题把。
要不你就重新合成一下27F,要不你就合成一个中间的测序引物反向接着1492R的引物继续测通,不用27F测了。

我已经开始从799反向合成引物往前测了,但是就是很奇怪,不知道原因27f的毛病在哪里,之前都很好的,没有问题的啊~~用别人的引物也是一样测不同
3楼2011-06-15 11:10:19
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shicaozhu

银虫 (小有名气)

我16s测序都是连在T载上面去测的,这样比较靠谱
5楼2012-04-07 13:46:41
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