24小时热门版块排行榜    

查看: 2932  |  回复: 7

kittykbh

铜虫 (正式写手)

[求助] 细菌16s pcr原液测序问题

请教各位大虾~~~我用的引物是27f和1492r,p的是细菌的16s全长,然后原液测序,双向测通后拼接。测序公司每次都能测出的我1492r,每次都是告诉我27f测不通,每次都是测到500bp左右以后断掉,我看了峰图,1492r很稳定也很好,飘峰一般都是在800bp以后了,但是就是27f总是测不通,到500bp突然就杂峰很大很多然后就断掉。
pcr的条带也是很明亮没有杂带的,能是什么原因呢???已经测了很多样品了,大部分的27f都测不通,急切的求指教啊~~
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiadongliang

金虫 (正式写手)

★ ★
dhd997(金币+2): 鼓励一下 2011-06-15 11:05:01
引用回帖:
Originally posted by kittykbh at 2011-06-14 23:36:35:
请教各位大虾~~~我用的引物是27f和1492r,p的是细菌的16s全长,然后原液测序,双向测通后拼接。测序公司每次都能测出的我1492r,每次都是告诉我27f测不通,每次都是测到500bp左右以后断掉,我看了峰图,1492r很稳 ...

你的27F引物合成不会有问题把。
要不你就重新合成一下27F,要不你就合成一个中间的测序引物反向接着1492R的引物继续测通,不用27F测了。
2楼2011-06-15 09:54:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kittykbh

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by xiadongliang at 2011-06-15 09:54:06:
你的27F引物合成不会有问题把。
要不你就重新合成一下27F,要不你就合成一个中间的测序引物反向接着1492R的引物继续测通,不用27F测了。

我已经开始从799反向合成引物往前测了,但是就是很奇怪,不知道原因27f的毛病在哪里,之前都很好的,没有问题的啊~~用别人的引物也是一样测不同
3楼2011-06-15 11:10:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

redbull2011

捐助贵宾 (正式写手)

【答案】应助回帖

kittykbh(金币+2): 2011-06-17 23:33:53
换家公司测试试
不同公司技术有差别 胶也让公司回收算了 省事
4楼2011-06-16 21:55:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shicaozhu

银虫 (小有名气)

我16s测序都是连在T载上面去测的,这样比较靠谱
5楼2012-04-07 13:46:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

465663473

铜虫 (小有名气)

估计是你的27F引物被核酸污染了,换一管新的引物给测序公司吧。
6楼2013-01-06 14:31:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wu_shiyong

银虫 (正式写手)

你直接把菌液给公司做给你结果得了!
低调稳重务实内敛---------------残
7楼2013-01-06 15:26:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kittykbh

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
2470457楼: Originally posted by wu_shiyong at 2013-01-06 15:26:14
你直接把菌液给公司做给你结果得了!

哇,好久远的贴了,我都快毕业了呢~~谢谢啦
8楼2013-01-06 23:49:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 kittykbh 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 基金系统什么内容也没有 30+3 winsaint 2026-08-27 6/300 2026-08-28 01:46 by alongwaytogo
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 (金币+5) +11 晴天加油 2026-08-26 12/600 2026-08-28 01:22 by li09465290@
[教师之家] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 XLGfUIdOmEAO 2026-08-27 4/200 2026-08-27 22:26 by 3RAFyYXYSwGS
[基金申请] 申请删除本帖 +6 lyz123lyz 2026-08-27 7/350 2026-08-27 17:31 by 宁静致远sy
[基金申请] 基金不中,共勉 +10 eulota 2026-08-26 10/500 2026-08-27 17:23 by lqllinqiaoli
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +5 叶九微 2026-08-26 5/250 2026-08-27 10:35 by l_zh2008
[基金申请] 为什么 国际(地区)合作与交流项目 没有放榜? 10+3 majunge000 2026-08-26 11/550 2026-08-27 08:42 by 北京莱茵编辑
[教师之家] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 LIbGuocjEEYw 2026-08-26 4/200 2026-08-27 04:33 by Ie9AyIAvGbvs
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 LIbGuocjEEYw 2026-08-26 4/200 2026-08-27 02:01 by Ie9AyIAvGbvs
[基金申请] 我不理解! +15 Edward_pc 2026-08-26 23/1150 2026-08-26 20:34 by zzuzxg
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +7 process2012 2026-08-23 10/500 2026-08-26 19:23 by hmhminy
[基金申请] 怎么查啊 +5 huang1991js 2026-08-26 5/250 2026-08-26 16:09 by Equinoxhua
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +23 koalala 2026-08-24 26/1300 2026-08-26 14:29 by 宝贝虫子
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 项目信息和经费信息在系统里都可以看到了 +6 wittyboy 2026-08-26 14/700 2026-08-26 10:55 by wittyboy
[基金申请] 牛来!米来!面来! +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
[基金申请] 明天应该可查了!? +6 chengyan1220 2026-08-23 6/300 2026-08-25 19:45 by zfd97
[基金申请] 如果此刻你正在为国基感到焦虑,不妨来听听这首《基金之外》 +8 scalable 2026-08-24 8/400 2026-08-25 12:52 by jnhyjjm
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +13 kulium 2026-08-21 16/800 2026-08-24 16:27 by superceng
信息提示
请填处理意见