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laokuang1988

铜虫 (小有名气)

[求助] PCR产物测序结果已有1人参与

PCR产物切胶回收后拿去测序,杯具了,出现结合问题,好多杂峰,怎么办?
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

【答案】应助回帖


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西瓜(金币+1): 鼓励应助 2012-01-06 18:46:49
论坛这方面问题很多,问前最好先站内搜索下。
简单方法就是做克隆,挑单克隆去测序。
Thank-you,so-blue.
2楼2012-01-06 13:28:50
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heroyl

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
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小丹木木(金币+1): 鼓励应助哦 2012-01-07 15:38:12
wanhscn(金币+2): Good! 2012-01-08 13:50:26
连T之后去测序吧,一般送PCR产物测序的都不是很好,可能和你用的胶回收试剂盒有关,如果你的DNA浓度能达到测序的要求的话你直接送PCR产物,不要回收,公司会帮你回收的,但个人还是推荐连T后送,又不是什么难事。
实验虐我千百遍,我待实验如初恋
3楼2012-01-07 13:57:12
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

【答案】应助回帖

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重新P,重新纯化。。。继续测。。。
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
4楼2012-01-07 15:16:35
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laokuang1988

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 天使托 at 2012-01-07 15:16:35:
重新P,重新纯化。。。继续测。。。

我的那个引物好像特异性和不强。但是我不知道我的模板序列,正在找基因,我怎么办好,求帮助,谢谢
5楼2012-01-07 20:19:48
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laokuang1988

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by heroyl at 2012-01-07 13:57:12:
连T之后去测序吧,一般送PCR产物测序的都不是很好,可能和你用的胶回收试剂盒有关,如果你的DNA浓度能达到测序的要求的话你直接送PCR产物,不要回收,公司会帮你回收的,但个人还是推荐连T后送,又不是什么难事。

上次我连了T载体拿去测序,可是老板说这样不好。
6楼2012-01-07 20:26:02
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痴客

木虫 (正式写手)

吃货250

【答案】应助回帖


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wanhscn(金币+1): 鼓励应助! 2012-01-08 13:50:16
切胶回收这步要做好,不要把弥散的带也切进去了,可以连接转化后送测
因为这个世界上这么多的狼,我这只牧羊犬只好放弃我的温顺,向着这个世界放出最耀眼的光。
7楼2012-01-08 00:12:53
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heroyl

木虫 (正式写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by laokuang1988 at 2012-01-07 20:26:02:
上次我连了T载体拿去测序,可是老板说这样不好。

没审美不好的,都一样的。
实验虐我千百遍,我待实验如初恋
8楼2012-01-08 13:41:51
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希罗雅

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

其实你也可以直接提供PCR产物,我所在的测序公司,就可以帮你纯化后,再测序。
凡事学习
9楼2014-05-12 15:28:23
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