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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR产物测序结果
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laokuang1988

铜虫 (小有名气)

[求助] PCR产物测序结果 已有1人参与

PCR产物切胶回收后拿去测序，杯具了，出现结合问题，好多杂峰，怎么办？
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1楼 2012-01-06 13:14:51
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜(金币+1): 鼓励应助 2012-01-06 18:46:49
论坛这方面问题很多，问前最好先站内搜索下。
简单方法就是做克隆，挑单克隆去测序。
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Thank-you，so-blue.
2楼2012-01-06 13:28:50
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heroyl

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木(金币+1): 鼓励应助哦 2012-01-07 15:38:12
wanhscn(金币+2): Good！ 2012-01-08 13:50:26
连T之后去测序吧，一般送PCR产物测序的都不是很好，可能和你用的胶回收试剂盒有关，如果你的DNA浓度能达到测序的要求的话你直接送PCR产物，不要回收，公司会帮你回收的，但个人还是推荐连T后送，又不是什么难事。
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实验虐我千百遍，我待实验如初恋
3楼2012-01-07 13:57:12
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
重新P，重新纯化。。。继续测。。。
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Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
4楼2012-01-07 15:16:35
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laokuang1988

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 天使托 at 2012-01-07 15:16:35:
重新P，重新纯化。。。继续测。。。

我的那个引物好像特异性和不强。但是我不知道我的模板序列，正在找基因，我怎么办好，求帮助，谢谢
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5楼2012-01-07 20:19:48
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laokuang1988

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by heroyl at 2012-01-07 13:57:12:
连T之后去测序吧，一般送PCR产物测序的都不是很好，可能和你用的胶回收试剂盒有关，如果你的DNA浓度能达到测序的要求的话你直接送PCR产物，不要回收，公司会帮你回收的，但个人还是推荐连T后送，又不是什么难事。

上次我连了T载体拿去测序，可是老板说这样不好。
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6楼2012-01-07 20:26:02
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痴客

木虫 (正式写手)

吃货250

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
wanhscn(金币+1): 鼓励应助！ 2012-01-08 13:50:16
切胶回收这步要做好，不要把弥散的带也切进去了，可以连接转化后送测
赞一下(1人) 回复此楼
因为这个世界上这么多的狼，我这只牧羊犬只好放弃我的温顺，向着这个世界放出最耀眼的光。
7楼2012-01-08 00:12:53
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heroyl

木虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by laokuang1988 at 2012-01-07 20:26:02:
上次我连了T载体拿去测序，可是老板说这样不好。

没审美不好的，都一样的。
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实验虐我千百遍，我待实验如初恋
8楼2012-01-08 13:41:51
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希罗雅

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

其实你也可以直接提供PCR产物，我所在的测序公司，就可以帮你纯化后，再测序。
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凡事学习
9楼2014-05-12 15:28:23
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