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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 【求助/交流】pcr测序问题
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JessieDai

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】pcr测序问题 已有8人参与

昨晚DGGE后割胶溶解做PCR，测序显示杂带太多，之前也做过，试验方法什么的都没有变化，就是测序不行，现在也不知道原因，希望有经验的大牛们给点指导意见，O(∩_∩)O谢谢
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1楼 2011-03-28 10:48:40
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xiadongliang

金虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+1): 鼓励发帖交流。 2011-03-28 20:04:27
克隆测序吧。没有别的办法，直接测序估计90%都是测序套峰/双峰的情况。
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2楼2011-03-28 11:06:52
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lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
你可以试试把PCR产物跑Agar胶纯化目的片断后测序。如果不行连T载体再测序。
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hehe
3楼2011-03-28 13:47:30
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0610616

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
克隆到T载体测序吧，我最近也做这类实验，克隆后效果好
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Everythingisok!
4楼2011-03-28 14:50:51
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen
★
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先纯化一下再拿去测序应该会好一些！
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Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
5楼2011-03-28 15:15:21
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xp198766

铁杆木虫 (著名写手)

小木虫职业打酱油滴~~！
★ ★
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amisking(金币+1): 鼓励发帖交流。 2011-03-28 20:04:45
克隆是个很好的选择，或者你调整下你的DGGE胶的浓度，看能不能把DNA分得更开一点
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6楼2011-03-28 17:52:04
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JessieDai

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by xp198766 at 2011-03-28 17:52:04:
克隆是个很好的选择，或者你调整下你的DGGE胶的浓度，看能不能把DNA分得更开一点

克隆很麻烦的，我们这边有一个同学在做，但是效果一直不是太好，所以不大想做克隆，其实我觉得胶的浓度改变也不一定会分得开，因为样品里面细菌的种类本来就很多的
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7楼2011-03-28 21:32:25
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JessieDai

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by xiadongliang at 2011-03-28 11:06:52:
克隆测序吧。没有别的办法，直接测序估计90%都是测序套峰/双峰的情况。

我去年做的一直可以的，测序结果还不错的，方法一点没变的
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8楼2011-03-28 21:33:07
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JessieDai

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by lvbobo823 at 2011-03-28 13:47:30:
你可以试试把PCR产物跑Agar胶纯化目的片断后测序。如果不行连T载体再测序。

估计除了测序没其他办法了
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9楼2011-03-28 21:33:55
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JessieDai

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 天使托 at 2011-03-28 15:15:21:
先纯化一下再拿去测序应该会好一些！

恩，再看看吧
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10楼2011-03-28 21:34:30
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