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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 16S rDNA测序问题
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yesucao

木虫 (正式写手)

[求助] 16S rDNA测序问题

我对需要测序的菌株DNA进行PCR，只发现了一条带才进行大量PCR割胶回收的，但是等转化大肠杆菌DH5a后，挑起它的转化子进行PCR，结果出现了两条带，目的条带是1500bp，同时我也做了阳性对照，也出现了两条一样的条带。
出现这样的结果，我还能不能把我的转化子摇菌送出去测序啊？？
要是送出去的话，会不会因为背景太杂，测不出来啊？？
还请各位大虾帮帮忙！！
Marker为15000bp，其左边为我挑取的转化子，其右边为阳性对照（直接是DNA进行PCR）
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1楼 2011-06-07 14:04:13
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475502411

铜虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
西瓜(金币+3): 鼓励交流 2011-06-07 23:25:30
yesucao(金币+5): 我也感觉像是非特异性的扩增，不然就是水出现问题了 2011-06-08 09:20:24
是不是载体上也有你引物的结合部位？如果是非特异性扩增不会影响测序结果的，因为他们是用的通用引物测的，你不妨试一试，反正测序不是太贵。
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可以朝九晚五，也能浪迹天涯
2楼2011-06-07 22:53:26
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yesucao

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 475502411 at 2011-06-07 22:53:26:
是不是载体上也有你引物的结合部位？如果是非特异性扩增不会影响测序结果的，因为他们是用的通用引物测的，你不妨试一试，反正测序不是太贵。

载体我用的是pMD19-T，用于16S rRNA测序的
赞一下 回复此楼
3楼2011-06-08 09:01:14
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smiled001

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
4楼2011-06-08 23:25:34
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