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yesucao

木虫 (正式写手)

[求助] 16S rDNA测序问题

我对需要测序的菌株DNA进行PCR,只发现了一条带才进行大量PCR割胶回收的,但是等转化大肠杆菌DH5a后,挑起它的转化子进行PCR,结果出现了两条带,目的条带是1500bp,同时我也做了阳性对照,也出现了两条一样的条带。
出现这样的结果,我还能不能把我的转化子摇菌送出去测序啊??
要是送出去的话,会不会因为背景太杂,测不出来啊??
还请各位大虾帮帮忙!!
Marker为15000bp,其左边为我挑取的转化子,其右边为阳性对照(直接是DNA进行PCR)
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475502411

铜虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
西瓜(金币+3): 鼓励交流 2011-06-07 23:25:30
yesucao(金币+5): 我也感觉像是非特异性的扩增,不然就是水出现问题了 2011-06-08 09:20:24
是不是载体上也有你引物的结合部位?如果是非特异性扩增不会影响测序结果的,因为他们是用的通用引物测的,你不妨试一试,反正测序不是太贵。
可以朝九晚五,也能浪迹天涯
2楼2011-06-07 22:53:26
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yesucao

木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by 475502411 at 2011-06-07 22:53:26:
是不是载体上也有你引物的结合部位?如果是非特异性扩增不会影响测序结果的,因为他们是用的通用引物测的,你不妨试一试,反正测序不是太贵。

载体我用的是pMD19-T,用于16S rRNA测序的
3楼2011-06-08 09:01:14
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smiled001

禁虫 (小有名气)

本帖内容被屏蔽

4楼2011-06-08 23:25:34
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