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[资源] 做16S rDNA鉴定时进行同源性比较的方法!!

前面我已经在环境版块公布了测序结果的处理方法及对测序结果的评判方法,如果有虫友需要了解可以在环境版块的资源帖查到到,现在本人紧接着上一步操作,整理出做16S rDNA鉴定时进行同源性比较的方法,希望对部分刚涉及到此方面的虫友有所帮助。

(2)序列同源性比较方法:
1,打开网页http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi;
2,在网页的中间部分有个“Basic BLAST”,其下有一个选项“nucleotide blast”;
3,点开“nucleotide blast”,出现一个空白框,上面有一行字“Enter accession number(s),gi(s),or FASTA sequence(s)”,将你的序列复制到这个空白框中;
4,其他的都不变,不必添加什么。注意网页中间部分有个Database,选中“Others (nr etc.)”;
5,点击网页下部的“BLAST”按钮,等待数十秒钟(不要急,多等一会哈!!),直到网页中出现一个很大的表格;
6,这个表格就是和你的细菌的16S rDNA序列相似性很高的序列。
Accession:去掉后面的“.1”就是可以查序列的GenBank登录号了;
Description:对菌株的描述;
7,把那个表格拖过去,会有很长很长一段对每个相似度较高序列的说明,其中在各个序列的前段部分会有以下几个数值:
Score:提交的序列和搜索出的序列之间的分值,越高说明越相似;
Expect:比对的期望值,比对越好,expect越小。一般在核酸层次的比对,expect值小于1e-10时,就算比对很好了,多数情况下为0;
Identities:提交的序列好参比序列的相似性;
Gaps:空位,指对不上位的碱基数目;
Strand:链的方向,Plus/Minus意味着提交的序列和参比序列是反向互补的;Plus/Plus意味着二者是皆为正向;
8,这样就可以从那个表格中挑选出一些有代表性的菌株,拷贝其16S rDNA序列,用于进一步的系统发育树分析;

系统发育树构建见下文。
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tlktlk88

新虫 (初入文坛)


★★★★★ 五星级,优秀推荐

下文呢?
6楼2011-09-10 12:56:25
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orangeleaf

铜虫 (正式写手)


★★★★★ 五星级,优秀推荐

好啊
7楼2011-09-11 07:49:14
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billowzeng

金虫 (正式写手)


★★★★★ 五星级,优秀推荐

引用回帖:
538000楼: Originally posted by tuobaohua at 2011-07-21 19:32:48:
前面我已经在环境版块公布了测序结果的处理方法及对测序结果的评判方法,如果有虫友需要了解可以在环境版块的资源帖查到到,现在本人紧接着上一步操作,整理出做16S rDNA鉴定时进行同源性比较的方法,希望对部分刚 ...

"Accession:去掉后面的“.1”就是可以查序列的GenBank登录号了"
您好,为什么genbank登录号要去掉".1"呢,而在blast时出来的序列都带了".1"?
9楼2012-03-29 17:19:45
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引用回帖:
1596182楼: Originally posted by billowzeng at 2012-03-29 17:19:45:
"Accession:去掉后面的“.1”就是可以查序列的GenBank登录号了"
您好,为什么genbank登录号要去掉".1"呢,而在blast时出来的序列都带了".1"?

不好意思,这个我也没搞明白
我在想是不是代表了一种分类
就像现在申请的专利,后面还.1   .2的
我也不清楚,期待高人解答吧
10楼2012-03-30 08:33:15
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dawnshao

新虫 (小有名气)


★★★ 三星级,支持鼓励

你好,请问一下,blast序列比对结果前面的是没有鉴定的序列,第三个是确定的种的序列,那么能直接用第三个作为比对序列?
十分感激!!!
11楼2012-04-03 18:09:55
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dawnshao

新虫 (小有名气)


错了,本来是想写五星级的。
12楼2012-04-03 18:10:37
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lql964006240

新虫 (初入文坛)


★★★★★ 五星级,优秀推荐

不懂,哎,太高深
13楼2012-04-08 13:49:39
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王金华

新虫 (初入文坛)


★★★★★ 五星级,优秀推荐

优秀 期待下文继续
14楼2012-06-01 09:43:38
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zy928

新虫 (初入文坛)


★★★★★ 五星级,优秀推荐

我也想请教一下楼主,我也是,一个序列blast后,前4个的各项参数是一模一样的,而对应的菌株Rhizobium sp.XjGEB-70 ,Agrobacterium tumefaciens strain XjGEB-58, Rhizobium sp. XjGEN-53 和 Rhizobium sp. CCNWSX0504,这种情况应该怎样确定?还有就是blast前Choose Search Set一项中,选others后,下方有个下拉菜单,是选择Nucleotide collection 还是16s ribosomal RNA sequence( bacteria and archaea),同一个序列选择不同的结果不一致
望楼主指教
15楼2012-09-28 19:35:28
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引用回帖:
1651773楼: Originally posted by zy928 at 2012-09-28 19:35:28
我也想请教一下楼主,我也是,一个序列blast后,前4个的各项参数是一模一样的,而对应的菌株Rhizobium sp.XjGEB-70 ,Agrobacterium tumefaciens strain XjGEB-58, Rhizobium sp. XjGEN-53 和 Rhizobium sp. CCNWS ...

额,不好意思啊,已经好久好久不搞这个了,现在做的东西与那个一点关系都没有了
已经想不起来了,你去微生物版再发帖问问吧,应该有人会的,不好意思
16楼2012-09-28 19:38:46
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贝壳v下了

铜虫 (初入文坛)


请问位大侠,序列对比的方法有哪些?
17楼2012-11-14 20:27:39
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来一桶2楼
2011-07-31 08:19   回复  
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xp1987663楼
2011-07-31 16:49   回复  
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2011-08-09 09:06   回复  
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vaivaiann5楼
2011-08-10 13:55   回复  
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瓶儿花8楼
2011-09-11 11:58   回复  
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winter200218楼
2013-01-23 10:18   回复  
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little198419楼
2013-05-22 16:13   回复  
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