24小时热门版块排行榜    

查看: 2325  |  回复: 12

shipolande

新虫 (初入文坛)

[求助] 土壤微生物16s rDNA 18s rDNA 抑制扩增不出来??????

土壤微生物16s rDNA 18s rDNA 一直扩增不出来,微生物总DNA是用试剂盒提取的,图示为土壤提取的DNA模板,可是一直就是P不出来,不知道是什么原因,自己稀释了10倍,50倍,100倍,只有50倍 的稍微有一点条带,但是很不明显,不知道什么原因,请大侠们指点指点 ,小弟不胜感激···········
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

shipolande
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

heavennew

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
zhang8826857: 金币+1, 欢迎交流 2012-07-02 22:57:56
1.可能是腐殖质太多,含有钙等金属离子,影响聚合酶活性,需要用螯合剂去除;
2.换一下引物,试一下;
3.退火温度是多少,这也是应该注意的问题。
5楼2012-07-02 22:33:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

老夏853

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

pcr 体系里面加1%的 BSA
8楼2012-09-07 09:38:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

0609michael

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by 老夏853 at 2012-09-07 09:38:04
pcr 体系里面加1%的 BSA

請問是PCR總量體積添加百分之一的BSA就好了嗎?
你通常都怎麼做?
也有的人會使用DMSO或Tween,那添加的比例是怎麼樣呢? 謝謝
10楼2012-09-18 09:26:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

maomao1426

木虫 (著名写手)

可能是土壤里腐殖质太多,需要除掉的。
2楼2012-07-02 08:45:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zqk0532

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
因为细菌的GC含量通常比较高,所以建议使用GC buffer P
3楼2012-07-02 10:10:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

swaucq

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
总DNA切胶回收纯化过吗?
不卑不亢
4楼2012-07-02 22:02:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

plumplumgxc

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
把DNA模板再处理一下,像切胶回收,酚氯仿抽提,都行
科研这条道不好走啊。。。
6楼2012-07-04 11:09:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tjhyf2012

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
稀释50倍能看到条带,总体来说还是土样中残留的腐殖质影响PCR扩增了。不知道楼主用的试剂盒和引物的信息。不过推荐一个盒子,我们一直用这个提取,石油土壤,火山土壤包括农耕地土壤的总DNA,效果蛮不错的。美国MO bio Ultra clean soil DNA 提取试剂盒。需要仔细阅读里面的troubleshooting,希望能够解决你的问题。
7楼2012-07-04 14:55:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lethebai

金虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by tjhyf2012 at 2012-07-04 14:55:44
稀释50倍能看到条带,总体来说还是土样中残留的腐殖质影响PCR扩增了。不知道楼主用的试剂盒和引物的信息。不过推荐一个盒子,我们一直用这个提取,石油土壤,火山土壤包括农耕地土壤的总DNA,效果蛮不错的。美国MO  ...

请问你是在哪买的?价格在多少?
9楼2012-09-11 10:40:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 shipolande 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] NSFC申报书里申请人简历中代表性论著还需要在申报书最后的附件里面再上传一遍吗 20+5 NSFC2026我来了 2026-03-10 14/700 2026-03-15 23:53 by 不负韶华的虎
[考研] 255求调剂 +3 李嘉慧, 2026-03-12 4/200 2026-03-14 16:58 by 有只狸奴
[考研] 265求调剂 +9 小木虫085600 2026-03-09 12/600 2026-03-14 01:11 by JourneyLucky
[考研] 307求调剂 +7 超级伊昂大王 2026-03-10 7/350 2026-03-14 00:49 by JourneyLucky
[考研] 308求调剂 +3 是Lupa啊 2026-03-10 3/150 2026-03-14 00:30 by JourneyLucky
[考研] 311求调剂 +5 牛乳糖的卡卡 2026-03-10 5/250 2026-03-14 00:05 by JourneyLucky
[考研] 311求调剂 +8 zchqwer 2026-03-10 8/400 2026-03-14 00:01 by JourneyLucky
[考研] 332求调剂 +3 zjy101327 2026-03-11 6/300 2026-03-13 22:48 by JourneyLucky
[考研] 求调剂(材料与化工327) +4 爱吃香菜啦 2026-03-11 4/200 2026-03-13 22:11 by JourneyLucky
[考研] 工科,求调剂 +3 我887 2026-03-11 3/150 2026-03-13 21:39 by JourneyLucky
[考研] 求调剂 +5 一定有学上- 2026-03-12 5/250 2026-03-13 18:31 by ms629
[考研] 314求调剂 +7 无懈可击的巨人 2026-03-12 7/350 2026-03-13 15:40 by JourneyLucky
[考研] 304求调剂(085602一志愿985) +12 化工人999 2026-03-09 12/600 2026-03-13 12:02 by JourneyLucky
[考研] 277求调剂 +4 anchor17 2026-03-12 4/200 2026-03-13 11:15 by 白夜悠长
[考研] 0856化工原理 +6 z2839474511 2026-03-10 6/300 2026-03-13 10:41 by houyaoxu
[考研] 296求调剂 +3 大口吃饭 身体健 2026-03-13 3/150 2026-03-13 10:31 by 学员8dgXkO
[考研] 化工学硕306求调剂 +9 42838695 2026-03-12 9/450 2026-03-13 10:16 by houyaoxu
[考研] 一志愿江南大学085701环境工程专硕总分287求调剂 +5 18266118446 2026-03-09 5/250 2026-03-11 16:51 by 2020015
[考研] 290求调剂 +3 柯淮然 2026-03-10 8/400 2026-03-11 13:48 by 柯淮然
[考研] 279求调剂 +3 莫xiao 2026-03-10 4/200 2026-03-11 08:06 by 斩魂滴兔子!
信息提示
请填处理意见