应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 土壤微生物16s rDNA 18s rDNA 抑制扩增不出来？？？？？？
131/2返回列表12下一页
查看: 2651  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

shipolande

新虫 (初入文坛)

[求助] 土壤微生物16s rDNA 18s rDNA 抑制扩增不出来？？？？？？

土壤微生物16s rDNA 18s rDNA 一直扩增不出来，微生物总DNA是用试剂盒提取的，图示为土壤提取的DNA模板，可是一直就是P不出来，不知道是什么原因，自己稀释了10倍，50倍，100倍，只有50倍 的稍微有一点条带，但是很不明显，不知道什么原因，请大侠们指点指点 ，小弟不胜感激···········
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
shipolande
1楼 2012-07-01 21:12:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

heavennew

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
zhang8826857: 金币+1, 欢迎交流 2012-07-02 22:57:56
1.可能是腐殖质太多，含有钙等金属离子，影响聚合酶活性，需要用螯合剂去除；
2.换一下引物，试一下；
3.退火温度是多少，这也是应该注意的问题。
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2012-07-02 22:33:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

老夏853

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

pcr 体系里面加1%的 BSA
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2012-09-07 09:38:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

0609michael

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by 老夏853 at 2012-09-07 09:38:04
pcr 体系里面加1%的 BSA

請問是PCR總量體積添加百分之一的BSA就好了嗎?
你通常都怎麼做?
也有的人會使用DMSO或Tween，那添加的比例是怎麼樣呢? 謝謝
赞一下(1人) 回复此楼
10楼2012-09-18 09:26:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

maomao1426

木虫 (著名写手)
可能是土壤里腐殖质太多，需要除掉的。
赞一下 回复此楼
2楼2012-07-02 08:45:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zqk0532

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
因为细菌的GC含量通常比较高，所以建议使用GC buffer P
赞一下 回复此楼
3楼2012-07-02 10:10:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

swaucq

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
总DNA切胶回收纯化过吗？
赞一下 回复此楼
不卑不亢
4楼2012-07-02 22:02:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

plumplumgxc

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
把DNA模板再处理一下，像切胶回收，酚氯仿抽提，都行
赞一下 回复此楼
科研这条道不好走啊。。。
6楼2012-07-04 11:09:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tjhyf2012

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
稀释50倍能看到条带，总体来说还是土样中残留的腐殖质影响PCR扩增了。不知道楼主用的试剂盒和引物的信息。不过推荐一个盒子，我们一直用这个提取，石油土壤，火山土壤包括农耕地土壤的总DNA，效果蛮不错的。美国MO bio Ultra clean soil DNA 提取试剂盒。需要仔细阅读里面的troubleshooting，希望能够解决你的问题。
赞一下 回复此楼
7楼2012-07-04 14:55:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lethebai

金虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by tjhyf2012 at 2012-07-04 14:55:44
稀释50倍能看到条带，总体来说还是土样中残留的腐殖质影响PCR扩增了。不知道楼主用的试剂盒和引物的信息。不过推荐一个盒子，我们一直用这个提取，石油土壤，火山土壤包括农耕地土壤的总DNA，效果蛮不错的。美国MO  ...

请问你是在哪买的？价格在多少？
赞一下 回复此楼
9楼2012-09-11 10:40:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 shipolande 的主题更新
131/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 jRl3mE6ddZGq 2026-08-03 9/450 2026-08-04 07:46 by k7OM8YghWbkC
[找工作] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 cu9Nq1xK233Z 2026-08-03 9/450 2026-08-04 07:37 by k7OM8YghWbkC
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 cu9Nq1xK233Z 2026-08-03 13/650 2026-08-04 07:30 by k7OM8YghWbkC
[教师之家] 基础研究怎么拉横向，学校到款任务越来越多，难以完成 拉横向，都有哪些途径啊 +9 锦衣卫寒战 2026-07-28 13/650 2026-08-04 07:21 by Ermito
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 jRl3mE6ddZGq 2026-08-03 8/400 2026-08-04 06:15 by k7OM8YghWbkC
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 cu9Nq1xK233Z 2026-08-03 6/300 2026-08-04 06:10 by k7OM8YghWbkC
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 cu9Nq1xK233Z 2026-08-03 9/450 2026-08-04 06:07 by k7OM8YghWbkC
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 jRl3mE6ddZGq 2026-08-03 6/300 2026-08-04 04:47 by k7OM8YghWbkC
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 cu9Nq1xK233Z 2026-08-03 7/350 2026-08-04 04:46 by k7OM8YghWbkC
[博后之家] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 cu9Nq1xK233Z 2026-08-03 8/400 2026-08-04 04:46 by k7OM8YghWbkC
[有机交流] 一个有机合成实验室都需要哪些设备？ 50+3 kf2781974 2026-07-31 9/450 2026-08-04 03:56 by kf2781974
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 cu9Nq1xK233Z 2026-08-03 8/400 2026-08-04 03:21 by k7OM8YghWbkC
[基金申请] 什么时候能放榜呀？ +3 Jacob678 2026-08-03 3/150 2026-08-03 16:14 by gltch
[基金申请] 面上再次挂了，太难了，躺也躺不了，倦也卷不过，小学校之殇！ +19 低垂的野花 2026-07-31 25/1250 2026-08-03 09:25 by gy116024
[基金申请] 2026年国自然面上资助率 +16 布布和一二 2026-07-30 22/1100 2026-08-03 09:20 by gy116024
[基金申请] 微信指数没变化，科研之友没阅读 +15 wangze12014 2026-07-28 19/950 2026-08-02 20:05 by 蔡棒棒菂
[考博] 2027年申博 50+3 射雕英雄胜 2026-07-30 3/150 2026-08-02 09:36 by lfy8008
[高分子] HXDI做水性聚氨酯乳液，是不是特别容易出渣 15+3 yuyusuv 2026-07-29 3/150 2026-07-31 09:21 by huizingga
[基金申请] 系统今天又提示维护了，估计离放榜不远了 +11 winnerche 2026-07-29 15/750 2026-07-30 23:08 by jnhyjjm
[基金申请] 你们的时间戳变了吗 +3 archvillain 2026-07-30 4/200 2026-07-30 18:53 by levinzhwen
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭