应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 土壤微生物16s rDNA 18s rDNA 抑制扩增不出来？？？？？？
131/2返回列表12下一页
查看: 2284  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

shipolande

新虫 (初入文坛)

[求助] 土壤微生物16s rDNA 18s rDNA 抑制扩增不出来？？？？？？

土壤微生物16s rDNA 18s rDNA 一直扩增不出来，微生物总DNA是用试剂盒提取的，图示为土壤提取的DNA模板，可是一直就是P不出来，不知道是什么原因，自己稀释了10倍，50倍，100倍，只有50倍 的稍微有一点条带，但是很不明显，不知道什么原因，请大侠们指点指点 ，小弟不胜感激···········
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
shipolande
1楼 2012-07-01 21:12:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

heavennew

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
zhang8826857: 金币+1, 欢迎交流 2012-07-02 22:57:56
1.可能是腐殖质太多，含有钙等金属离子，影响聚合酶活性，需要用螯合剂去除；
2.换一下引物，试一下；
3.退火温度是多少，这也是应该注意的问题。
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2012-07-02 22:33:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

老夏853

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

pcr 体系里面加1%的 BSA
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2012-09-07 09:38:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

0609michael

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by 老夏853 at 2012-09-07 09:38:04
pcr 体系里面加1%的 BSA

請問是PCR總量體積添加百分之一的BSA就好了嗎?
你通常都怎麼做?
也有的人會使用DMSO或Tween，那添加的比例是怎麼樣呢? 謝謝
赞一下(1人) 回复此楼
10楼2012-09-18 09:26:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

maomao1426

木虫 (著名写手)
可能是土壤里腐殖质太多，需要除掉的。
赞一下 回复此楼
2楼2012-07-02 08:45:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zqk0532

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
因为细菌的GC含量通常比较高，所以建议使用GC buffer P
赞一下 回复此楼
3楼2012-07-02 10:10:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

swaucq

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
总DNA切胶回收纯化过吗？
赞一下 回复此楼
不卑不亢
4楼2012-07-02 22:02:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

plumplumgxc

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
把DNA模板再处理一下，像切胶回收，酚氯仿抽提，都行
赞一下 回复此楼
科研这条道不好走啊。。。
6楼2012-07-04 11:09:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tjhyf2012

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
稀释50倍能看到条带，总体来说还是土样中残留的腐殖质影响PCR扩增了。不知道楼主用的试剂盒和引物的信息。不过推荐一个盒子，我们一直用这个提取，石油土壤，火山土壤包括农耕地土壤的总DNA，效果蛮不错的。美国MO bio Ultra clean soil DNA 提取试剂盒。需要仔细阅读里面的troubleshooting，希望能够解决你的问题。
赞一下 回复此楼
7楼2012-07-04 14:55:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lethebai

金虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by tjhyf2012 at 2012-07-04 14:55:44
稀释50倍能看到条带，总体来说还是土样中残留的腐殖质影响PCR扩增了。不知道楼主用的试剂盒和引物的信息。不过推荐一个盒子，我们一直用这个提取，石油土壤，火山土壤包括农耕地土壤的总DNA，效果蛮不错的。美国MO  ...

请问你是在哪买的？价格在多少？
赞一下 回复此楼
9楼2012-09-11 10:40:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 shipolande 的主题更新
131/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭