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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 土壤微生物16s rDNA 18s rDNA 抑制扩增不出来？？？？？？
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shipolande

新虫 (初入文坛)

[求助] 土壤微生物16s rDNA 18s rDNA 抑制扩增不出来？？？？？？

土壤微生物16s rDNA 18s rDNA 一直扩增不出来，微生物总DNA是用试剂盒提取的，图示为土壤提取的DNA模板，可是一直就是P不出来，不知道是什么原因，自己稀释了10倍，50倍，100倍，只有50倍 的稍微有一点条带，但是很不明显，不知道什么原因，请大侠们指点指点 ，小弟不胜感激···········
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shipolande
1楼 2012-07-01 21:12:47
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zqk0532

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
因为细菌的GC含量通常比较高，所以建议使用GC buffer P
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3楼2012-07-02 10:10:51
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maomao1426

木虫 (著名写手)
可能是土壤里腐殖质太多，需要除掉的。
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2楼2012-07-02 08:45:37
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swaucq

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
总DNA切胶回收纯化过吗？
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不卑不亢
4楼2012-07-02 22:02:40
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heavennew

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
zhang8826857: 金币+1, 欢迎交流 2012-07-02 22:57:56
1.可能是腐殖质太多，含有钙等金属离子，影响聚合酶活性，需要用螯合剂去除；
2.换一下引物，试一下；
3.退火温度是多少，这也是应该注意的问题。
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5楼2012-07-02 22:33:39
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