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shipolande

新虫 (初入文坛)

[求助] 土壤微生物16s rDNA 18s rDNA 抑制扩增不出来??????

土壤微生物16s rDNA 18s rDNA 一直扩增不出来,微生物总DNA是用试剂盒提取的,图示为土壤提取的DNA模板,可是一直就是P不出来,不知道是什么原因,自己稀释了10倍,50倍,100倍,只有50倍 的稍微有一点条带,但是很不明显,不知道什么原因,请大侠们指点指点 ,小弟不胜感激···········
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shipolande
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zqk0532

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
因为细菌的GC含量通常比较高,所以建议使用GC buffer P
3楼2012-07-02 10:10:51
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查看全部 13 个回答

maomao1426

木虫 (著名写手)

可能是土壤里腐殖质太多,需要除掉的。
2楼2012-07-02 08:45:37
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swaucq

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
总DNA切胶回收纯化过吗?
不卑不亢
4楼2012-07-02 22:02:40
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heavennew

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
zhang8826857: 金币+1, 欢迎交流 2012-07-02 22:57:56
1.可能是腐殖质太多,含有钙等金属离子,影响聚合酶活性,需要用螯合剂去除;
2.换一下引物,试一下;
3.退火温度是多少,这也是应该注意的问题。
5楼2012-07-02 22:33:39
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