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自由飞翔329

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于菌株16SrDNA序列鉴定的问题

刚接触微生物方面的东西,很多东西不懂,我要做的是菌株筛选,但看了文献之后发现,在菌株鉴定的时候有的人就是扩增目的片段,纯化后测定16SrDNA的序列;而有的人则是还要接着制备重组质粒,测定重组质粒的核苷酸序列;我想问一下这两种方法适合哪种情况,各自的优缺点是什么?
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jingma1982

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

自由飞翔329(金币+1): 恩,好的,谢谢啦 2011-09-19 09:20:12
如果你的菌株是纯的单一菌株,可以直接扩增纯化16SrDNA。如果是混菌,是要做克隆的。
2楼2011-09-18 20:12:15
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于清

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

自由飞翔329(金币+1): 谢谢 2011-09-19 09:19:48
你得先分离纯化细菌,然后才能提取DNA,做接下来的16SrDNA,PCR之后测序列,最好PCR产物跑个电泳,心里有底,建议你去问做这个的师兄,这是基本分子技术,很多人做。
Usingthemoonasatarget,evenifyoufelloff,youwillfallinthestars
3楼2011-09-18 22:16:03
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girlfisher

金虫 (小有名气)

作克隆的目的是获得完整得16S rDNA序列,直接PCR在测序初始和末尾的片断不可信
现在要提交到数据库的序列必须是克隆测得的,只有这样才能找到引物序列
4楼2011-09-20 11:28:55
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20093651

铁杆木虫 (职业作家)

嗯,只要菌是纯的,就直接P了就可以测序了,如果不纯,则需要克隆
但行好事,莫问前程
5楼2013-05-27 23:26:11
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