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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 关于菌株16SrDNA序列鉴定的问题
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自由飞翔329

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于菌株16SrDNA序列鉴定的问题

刚接触微生物方面的东西，很多东西不懂，我要做的是菌株筛选，但看了文献之后发现，在菌株鉴定的时候有的人就是扩增目的片段，纯化后测定16SrDNA的序列；而有的人则是还要接着制备重组质粒，测定重组质粒的核苷酸序列；我想问一下这两种方法适合哪种情况，各自的优缺点是什么？
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1楼 2011-09-18 19:36:07
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girlfisher

金虫 (小有名气)
作克隆的目的是获得完整得16S rDNA序列，直接PCR在测序初始和末尾的片断不可信
现在要提交到数据库的序列必须是克隆测得的，只有这样才能找到引物序列
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4楼2011-09-20 11:28:55
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jingma1982

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

自由飞翔329(金币+1): 恩，好的，谢谢啦 2011-09-19 09:20:12
如果你的菌株是纯的单一菌株，可以直接扩增纯化16SrDNA。如果是混菌，是要做克隆的。
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2楼2011-09-18 20:12:15
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于清

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

自由飞翔329(金币+1): 谢谢 2011-09-19 09:19:48
你得先分离纯化细菌，然后才能提取DNA，做接下来的16SrDNA，PCR之后测序列，最好PCR产物跑个电泳，心里有底，建议你去问做这个的师兄，这是基本分子技术，很多人做。
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3楼2011-09-18 22:16:03
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20093651

铁杆木虫 (职业作家)
嗯，只要菌是纯的，就直接P了就可以测序了，如果不纯，则需要克隆
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但行好事，莫问前程
5楼2013-05-27 23:26:11
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