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b529941390

木虫 (正式写手)

[交流] 郁闷啊,提不出质粒! 已有7人参与

用的是pTRC 6His的质粒载体,需要提取质粒测序,老是提取不出来,郁闷啊,更不爽的是,在做菌落PCR和质粒PCR的时候,阴性对照也有了条带!
做生物的东西怎么这么麻烦呢,好像去做化学啊!
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不离不弃不易不移
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wangdandelia

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
Originally posted by b529941390 at 2011-07-07 17:06:53:
提取过程用的是kit
然后菌是从-80度跳出来的,在LB A+的培养基中的,然后20mL提取质粒,1uL电泳竟然都看不到条带!  后来试了下8uL电泳,可以看到很弱的质粒条带

提完质粒可以测一下浓度,用 nanodrop测DNA浓度,试着多提几次就有经验了,试验需要多重复,然后熟能生巧,一切都会好起来的~~~
9楼2011-07-08 11:06:17
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holyala

木虫 (著名写手)

砖家


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
提质粒...这个~~楼主有分析过是什么原因吗?摇菌、提取、检测等等步骤都有可能出问题哦...其实提质粒还蛮简单的,至少比提RNA容易多了。
2楼2011-07-07 16:03:53
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阿修罗Axuro

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
生物和化学  自然科学里面最悲剧的两个专业~~~~~~~~
3楼2011-07-07 16:31:33
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b529941390

木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by holyala at 2011-07-07 16:03:53:
提质粒...这个~~楼主有分析过是什么原因吗?摇菌、提取、检测等等步骤都有可能出问题哦...其实提质粒还蛮简单的,至少比提RNA容易多了。

提取过程用的是kit
然后菌是从-80度跳出来的,在LB A+的培养基中的,然后20mL提取质粒,1uL电泳竟然都看不到条带!  后来试了下8uL电泳,可以看到很弱的质粒条带
不离不弃不易不移
4楼2011-07-07 17:06:53
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