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fcopm

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】检测都目的片段,但提不出质粒! 已有5人参与

请教:
     我用1301构建载体,做菌液PCR可以得到目的片段,可是用试剂盒提质粒,提不出。请问是什么原因!请指教,谢谢!
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fjt198719

木虫 (著名写手)

永远的菜鸟

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1):鼓励交流 2010-10-22 18:36:50
首先PCR这种东西很不准确的,证明转没转成功,还是要抽质粒酶切验证的,转化子质粒快检验证后,可以迅速挑选阳性克隆子,另外抽质粒本人觉得手提就很好了
独YY不如众YY!!!
2楼2010-10-22 18:24:44
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foryever

木虫 (文坛精英)

假装忧伤的枯木桩

酶切是必需的,最好不要省
         ♨物是人非事事休,欲语泪先流♨
3楼2010-10-22 18:45:40
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fcopm

新虫 (初入文坛)

现在是质粒提不出来!一起的其他的载体都能提出来!
4楼2010-10-23 18:16:32
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zj20101989

木虫 (小有名气)

孤雪飞萍

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-10-25 08:28:54
若是菌落PCR之后接着提,提不出,可能是试剂盒有问题,或者操作过程中,有很不当的地方(一般性的操作不当,跑胶后应当也会有条带,只不过不是一条或三条);若是长时间之后才提的,有可能是质粒丢失。
随缘随性,不争不胜。
5楼2010-10-23 19:37:01
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dzm317

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我有几次也是这个样子  应该是长的杂菌 不是要的质粒
6楼2010-10-24 20:01:14
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