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吴德光

禁虫 (小有名气)

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清风寨

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


amisking(金币+1): 鼓励发帖交流。 2011-09-25 20:59:10
我去 这个问题我也遇到过  菌落PCR鉴定是阳性 质粒抽出来大小也对 可就是酶切切不开  郁闷的我 后来不得已又重新连的给连好的
冷风过心变热
2楼2011-09-25 18:33:57
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aayqaa

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


amisking(金币+1): 鼓励应助。 2011-09-25 20:59:27
看不到不一定是没切下来,测序正确的话应该没问题,一般切下来的条带会很淡,可以试试在电泳时多加点样,有时候是需要用意念来看到的,呵呵
3楼2011-09-25 19:19:44
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xt123xt

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

目的片段如果太小就可能不明显
4楼2011-09-25 20:02:18
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xt123xt

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


amisking(金币+1): 鼓励发帖交流。 2011-09-25 20:59:38
用眼睛的余光看 不要集中注意力正面看
5楼2011-09-25 20:03:27
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清风寨

银虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by aayqaa at 2011-09-25 19:19:44:
看不到不一定是没切下来,测序正确的话应该没问题,一般切下来的条带会很淡,可以试试在电泳时多加点样,有时候是需要用意念来看到的,呵呵

测序都正确 无论加样多少都不行  就是切不开 换了新的酶也不行  可是重新连的一切就开
冷风过心变热
6楼2011-09-26 08:31:35
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

【答案】应助回帖

有可能酶切位点的地方有碱基突变了。
Thank-you,so-blue.
7楼2011-09-26 10:53:12
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分子菜鸟

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


西瓜(金币+1): good!很活跃啊! 2011-09-27 14:16:49
吴德光(金币+4): 谢谢,您的分析很好,我试试,我连的片段有两个300左右,还有一个1600 2011-10-07 22:49:15
酶是不是有问题?用两种酶分别做次单酶切,点个质粒作对照看看这两个酶是不是有问题。buffer也检查一下……连接的片段有多大?
8楼2011-09-27 10:37:00
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原韬

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

单酶双切有时候会有这样的问题,选择一下加入另一种酶做个双酶双切,看看能不能切出特异条带
9楼2011-09-29 09:55:08
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临风7071

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


西瓜(金币+1): good 2011-09-29 18:44:39
最有可能的是你选的酶切位点在大肠杆菌中被甲基化了,识别不了。
10楼2011-09-29 11:43:51
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